1994 年度実績報告書

パラニューロン特異的なCa-シグナル関連蛋白のクローニングとそ現局在について

研究課題

研究課題/領域番号	06670001
研究機関	東北大学
研究代表者	近藤尚武東北大学, 医学部, 教授 (20004723)
キーワード	CaMIVキナーゼ / 遺伝子クローニング / 抗体 / 免疫組織化学 / 末梢ニューロン / パラニューロン
研究概要	カルシウムとカルモジュリアンに依存性の蛋白質リン酸化酵素のうちで小脳顆粒細胞に特異的な分子がCaMキナーゼIV型として見出され、その遺伝子クローニングが他者により報告された。本研究ではこの分子の遺伝子をさらに解析した結果、既報の分子の3′-翻訳領域にアミノ酸28個が新たに付加した分子を発見してCaMキナーゼβ型と名づけ、既報のものをそのα型として区別した。次いで、両型に共通の翻訳領域で159個のアミノ酸からなるペプチドを大腸菌に遺伝子をもとに発現させ、ウサギに免疫させて特異抗体を得た。免疫ブロット法によりこの得られた抗CaMキナーゼIV抗体は、分子量約61と63kDの2本帯を示した。この特異抗体を用いて先ず中枢神経全体を、そして次に末梢神経節といくつかのパラニューロンを免疫組織化学的に検索して、CaMキナーゼIVの局在を精査した。中枢神経系では、小脳顆粒細胞は勿論のこと前脳から脊髄にわたって中型と小型ニューロンのほとんど全てが免疫陽性であり、免疫陽性産物はそれぞれのニューロンの核に局在して見出された。小脳プルキニエ細胞や脳幹における運動神経核の大型ニューロンは免疫陰性であった。この所見は我々が既に報告した遺伝子組織化学的所見と完全に一致した。末梢でのCaMキナーゼIV免疫反応は、交感・副交感神経節とおよび腸壁内神経節のほとんど全てのニューロンと知覚神経節の中・小型ニューロンに見出され、その核にのみ局在していた。軸索には明瞭な免疫反応は検出されなかった。さらにパラニューロン代表である副腎髄質の全てのクロム親和細胞が免疫陽性を示し、免疫反応物はやはり核に局在していた。その他、頸動脈小体主細胞でもその核が免疫陽性を示した。以上の所見から、中・小型ニユーロンおよびパラニューロン核におけるなんらかの情報伝達にCaMキナーゼIVが重要な機能を担っていることが強く示唆された。今後、パラニューロンの分泌亢進や抑制および知覚刺激等の実験条件でこの分子の発現変動を調べる予定である。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] H.SAKAGAMI,H,KONDO: "Immunohistochemical localization of Ca/calmodulin-dependent protein kinase type IV in the peripheral ganglia and paraganglia of developing and moture rats" Brain Research. 666. 173-181 (1994)
[文献書誌] Y.Owad,H.KONDO: "Moleculap cloning of rat cDNA for cytosolic phospholipsase A^2 and increased gene expression in the dentate gyrus following transient forebrain ischemia" Molecular Brain Research. 27. 364-368 (1994)
[文献書誌] M.Watanabe,H.KONDO: "Moleculap cloning of rat cDNAsfor the ζ and θ subtypes of 14-3-3 protein and differentiol distributions of their mRNAs in the brain" Molecular Brain Research. 25. 113-121 (1994)
[文献書誌] H.SAKAGAMI,H.KONDO: "Localization of phosphatose inhibitor-1 mRNA in the developing and adult rat brain in comparison with that of protein phosphatase-1 mRNAs" Molecular Brain Research. 25. 7-8 (1994)
[文献書誌] H.SAKAGAMI,HKONDO: "Re-examination of the ontogeny in the gene expression of DAARPP-32 in the rat brain" Molecular Brain Research. 25. 67-72 (1994)
[文献書誌] K.Goto,H.KONDO: "Localization of mRNAs for calpain and calpastatin in the adult rot brain by in situ hybridization histochemistry" Moiecular Brain Research. 23. 40-46 (1994)

1994 年度 実績報告書

パラニューロン特異的なCa-シグナル関連蛋白のクローニングとそ現局在について

研究代表者

近藤 尚武 東北大学, 医学部, 教授 (20004723)

研究成果

[文献書誌] H.SAKAGAMI,H,KONDO: "Immunohistochemical localization of Ca/calmodulin-dependent protein kinase type IV in the peripheral ganglia and paraganglia of developing and moture rats" Brain Research. 666. 173-181 (1994)

[文献書誌] Y.Owad,H.KONDO: "Moleculap cloning of rat cDNA for cytosolic phospholipsase A^2 and increased gene expression in the dentate gyrus following transient forebrain ischemia" Molecular Brain Research. 27. 364-368 (1994)

[文献書誌] M.Watanabe,H.KONDO: "Moleculap cloning of rat cDNAsfor the ζ and θ subtypes of 14-3-3 protein and differentiol distributions of their mRNAs in the brain" Molecular Brain Research. 25. 113-121 (1994)

[文献書誌] H.SAKAGAMI,H.KONDO: "Localization of phosphatose inhibitor-1 mRNA in the developing and adult rat brain in comparison with that of protein phosphatase-1 mRNAs" Molecular Brain Research. 25. 7-8 (1994)

[文献書誌] H.SAKAGAMI,HKONDO: "Re-examination of the ontogeny in the gene expression of DAARPP-32 in the rat brain" Molecular Brain Research. 25. 67-72 (1994)

[文献書誌] K.Goto,H.KONDO: "Localization of mRNAs for calpain and calpastatin in the adult rot brain by in situ hybridization histochemistry" Moiecular Brain Research. 23. 40-46 (1994)

1994 年度実績報告書

近藤尚武東北大学, 医学部, 教授 (20004723)