| 研究概要 |
すでに我々はヒト大動脈内皮細胞を用い,蛍光色素Fura-2/AMを用い,細胞内Ca^<2+>濃度の変化を顕微蛍光側光装置(CAM-230)を用いて測定することによって,細胞内へのCa^<2+>流入が細胞内からのK^+流出ではなく,細胞外からのCl^-流入に依存していることを初めて明らかにした.本年度は昨年度に引き続き,選択的に小胞体Ca^<2+>-ATPaseを抑制するThapsigarginやCyclopiazonic acidによって貯蔵部位を枯渇しても,Cl^-依存性のCa^<2+>流入が引き起こされることを確認し,Ca^<2+>流入が貯蔵部の枯渇とどのように連関しているかを解析した.
外液Ca^<2+>存在下で,培養内皮細胞にTGやCPAを作用させると,一過性の[Ca^<2+>]_iの増加相に続き,緩やかに下降する持続相がみられた.外液Ca^<2+>除去下でTGやCPAを作用させると,一過性の増加相のみとなった.また,持続相は外液Ca^<2+>の除去,外液Cl^-濃度の低下,Cl^- channel blockerであるN-phenylanthranilic acidの処置により抑制された.さらにTGあるいはCPA存在下でhistamineを処置するとhistamineによる[Ca^<2+>]_iの増加反応はTGあるいはCPAの前処置時間が長くなるにつれ,より抑制された.以上の結果から,細胞内ストアからのCa^<2+>遊離による[Ca^<2+>]_iの増加あるいは細胞内ストアの枯渇がCl^-依存性にCa^<2+>流入を引き起こすことが強く示唆された.受容体刺激によるCa^<2+>流入においても,細胞内ストアからのCa^<2+>遊離あるいは細胞内ストアの枯渇が必須と考えられた。
以上の結果をまとめて雑誌(Eur.J.Pharmacol.)に発表した.
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