| 研究課題/領域番号 |
06670149
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
医化学一般
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
野見山 尚之 熊本大学, 医学部, 講師 (00156225)
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| 研究分担者 |
三浦 洌 熊本大学, 医学部, 教授 (70093466)
棚瀬 純男 熊本大学, 医学部, 助教授 (20112401)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1995
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| キーワード | サイトカイン / ケモカイン / LD78 / 転写調節因子 / サイレンサー / MCP-3 / YAC / データベース |
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| 研究概要 |
我々はケモカインLD78遺伝子のプロモーター中に正および負に働く転写因子が結合する制御配列ICK-1のほかに第2イントロン中にサイレンサーが存在することを見い出した。このサイレンサーはT細胞株Jurkatなどでもプロモーターの活性をある程度抑制することから、mRNAを発現する細胞にはモジュレーターとも呼ぶべき配列に結合する因子が存在し、それがサイレンサーを細胞特異的に不活化すると考えられた。本研究ではこれらの配列の解析やそれらに結合する因子の精製を試みたが、現在の精製技術では非常に困難であることがわかった.一方、同じケモカイン・ファミリーのメンバーであるMCP-3のプロモーター解析を行ったところ、MCP-3 mRNAを構成的に発現している骨肉腫細胞株MG-63のほかに、発現していない細胞株HeLaなどでも強いプロモーター活性を示した.LD78プロモーターも同様に発現していないHeLa細胞で強い活性を示すことから、イントロン中のサイレンサーのほかに、より強力なサイレンサーが存在し、しかもそのサイレンサーはクラスターを形成しているケモカイン遺伝子全体の発現を制御している可能性が示唆された。そこでまずこのケモカイン遺伝子クラスター全領域の構造を明らかにするために、酵母人工染色体(YAC)の単離を行った.その結果数MbにわたるYACコンティグを作製し、既知のケモカイン遺伝子のほかに、expressed sequence tags(EST)データベースから見いだした新ケモカイン遺伝子4個もそのコンティグ内にマップされた.したがってこのコンティグ内に未発見のケモカイン遺伝子やサイレンサー配列が存在していると十分予想される.今後このYACを用いてのサイレンサー配列の同定やそれに結合する因子の解析へと研究を進めたい.またESTデータベース検索の結果の公開をインターネットのWWWを通じて開始した.
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