ヒト副腎皮質ステロイド合成・分泌への成長因子及びサイトカインの作用機序の検索-ストレスへの新しい生体防御機序の解明-

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06670181
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 笹野 公伸 東北大学, 医学部, 助手 (50187142)
• 研究分担者: 高橋 和宏 東北大学, 医学部, 助手 (80241628) ; 前原 郁夫 東北大学, 医学部, 助手 (10240665)
• キーワード: 副腎皮質 / 細胞培養 / ステロイド代謝 / 免疫組織化学 / 画像解析 / ステロイド合成酵素

研究概要

ヒト正常副腎皮質を用いた研究では平成6年度までの成長因子の発現と関連する細胞死と細胞増殖、すなわち細胞回転を検討した。すなわちKi67の免疫染色で細胞増殖を、TUNEL法でアポトーシスを検索し、ヒト副腎では束状帯で増殖し、球、網状帯で除去されるという事を初めて証明した。
ウシ副腎皮質初代培養細胞の実験では、従来長期培養は困難と考えられていたが、培養開始後14日目までコーチゾール合成、分泌能及びACTHへの反応性を保持しながら培養可能である事を示した。又P450_<C17>、P450_<SCC> (side chain cleavage)等のステロイド合成酵素の免疫染色による検討から紡錘型を呈する細胞でもステロイド合成能を有している事が判明した。培養細胞の蛋白発現量を定量化するにあたっては、ELISA法などとは異なり3次元的要素も考慮して検討していかなくてはならない。又ステロイド合成酵素の蛋白発現量には培養細胞cluster間で著明な差異が見られることから、まず細胞モデルを用いた副腎皮質培養細胞1ケもしくは1 clusterあたりでの酵素蛋白発現の定量化を検討した。すなわちReacti-Gel HW-65にP450scc抗原を付着させた細胞モデルを作成して、P450scc抗体を用いて免疫染色を行ない、画像解析装置を用いてgel集魂内の発色強度の解析を行なった。この実験系からあらかじめ抗原量、抗体希釈濃度と発色強度(OD値)の変移の関係を解析する事で、副腎皮質培養細胞1ケあたりでのステロイド合成酵素の発現の程度を解析する事が可能であると考えられた。次に実際の副腎皮質培養細胞でこの系を応用すると、ACTH投与で細胞1ケあたりの発現量が増加する事が示され、今後の副腎皮質機能の解析に極めて有用であると考えられた。

研究成果

• [文献書誌] Kazuto Takayama et al.: "Immunohistochemical localization of Ad4-binding protein with correlation to steroidogenic enzyme expression in cycling human ovaries and sex cord stromal tumors" J Clin Endocr in Metabolism. 80. 2815-2821 (1995)
• [文献書誌] Hironobu Sasano et al.: "Ad4BP in the human abrenal cortex and its disorders." J Clin Endocr in Metabolism. 80. 2378-2380 (1995)
• [文献書誌] Fumitoshi Satoh et al.: "Adrenomedullin in human brain, adrenal glands and tumor tissues of pheochromocytoma, ganglioneuroblastoma and neuroblastoma." J Clin Endocr in Metabolism. 80. 1750-1752 (1995)
• [文献書誌] Hironobu Sasano et al.: "Adrenocortical cytopathology" Am J Clin Pathol. 104. 161-166 (1995)
• [文献書誌] Norio Wada et al.: "A case of deoxycorticosterone-producing adrenal adenoma." Endocrine J. 42. 637-642 (1995)
• [文献書誌] Hironobu Sasano: "In situ end labeling and its applications to the study of endocrine disease : How can we study programmed cell death in surgical pathology materials?" Endocrine Pathol. 6. 87-89 (1995)
• [文献書誌] Hironobu Sasano et al.: "Transcription factor adrenal 4 binding protein as a marker of adrenocortical malignancy." Human Pathol. 26. 1154-1156 (1995)
• [文献書誌] Yoshio Murakami et al.: "Young female patient with testosterone-producing adrenocortical adenoma also showing sings of subclinical Cushing's syndrome." Endocrine Journal. 42. 283-288 (1995)
• [文献書誌] Hironobu Sasano et al.: "Immunolocalization of dehydroepiandrosterone sulfotransferase in normal and pathologic human adrenal gland." Modern Pathology. 8. 891-896 (1995)