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(1)トキソプラズマ(Tp)DNAポリメラーゼ(pol)の生化学的研究:Tpの強毒株(RH)DNA pol活性の性状については先に明らかにしたが、Tpにはマウスに対する毒性を異にする種々の株が存在する。そこで、弱毒株のDNApol活性を強毒性のそれと比較しつつ検討した。弱毒株としてはME49を用い、その増殖型虫体は、cortizoneで処理したマウスにME49(シスト)を感染させ、6日後に腹水から得た。同じ虫体数の両株から粗抽出液を調整した。両株由来粗抽出液中のDNA pol活性を測定したところ、虫体当りの活性はRH株のほうが、ME49株に比し高い値であった。Mg^<2+>イオンは両株DNA pol活性の発現に必須であり、また、高濃度KC1によって両株の活性は著しく抑制された。高等動物DNApolの抑制剤の影響のついて調べたところ、両株DNApol活性はともにN-ethylmaleimide(DNApol α、γ、δ、εの抑制剤))、ddTTP(DNA pol β、γの抑制剤)によって抑制されたが、aphidicolin(DNA pol α、δ、εの抑制剤)に対してはほとんど抑制されず、これらの抑制剤に対する感受性に違いは認められなかった。以上の結果から、検出された両株DNA pol活性は、その性状はほぼ同様であったが、虫体当りの活性は強毒性の方が高いことが示唆された。(2)TpDNApol遺伝子のクローニング:TpDNApol δ cDNAのクローニングを行った。DNA pol δ遺伝子の保存領域RIIおよびRIに相当する領域のプライマーを数種類合成し、これを用いてRT-PCRを行い、cDNA断片を得た。これらをシークエンスした結果、そのうちの一つがpolδ遺伝子の一部であることを確認した。これをプローブとしてTpcDNAライブラリーをスクリーニングし陽性クローンを得た。このうち、そのサイズの大きいものをpUCにサブクローニングしシークエンスを継続中である。
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