CD45のリガンド同定の試み

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06670367
• 研究機関: (財)東京都神経科学総合研究所
• 研究代表者: 荻本 真美 (財)東京都神経科学総合研究所, 微生物学・免疫学研究部門, 主事 (80158609)
• 研究分担者: 片桐 達雄 (財)東京都神経科学総合研究所, 微生物学・免疫学研究部門, 主事 (00233742) ; 矢倉 英隆 (財)東京都神経科学総合研究所, 微生物学・免疫学研究部門, 副参事 (60166486)
• キーワード: CD45 / レセプター型チロシンホスファターゼ / CD45リガンド / CD45結合分子

研究概要

マウス未熟B細胞株から、分子篩クロマトグラフィーと2種のアフィニティークロマトグラフィーによって高度にCD45を精製し、CD45固定化カラムとビオチン化CD45を調製し、CD45と特異的に結合するタンパク質の検索を行った。
まず、マウスの脾臓を可溶画分と膜画分に分画し、それぞれの画分からCD45固定化カラムに吸着したタンパク質をSDS-PAGEで分析した.それぞれの画分にはCD45に結合するタンパク質が複数存在したが、ビオチン化CD45をプローブとしてウエスタン解析により可溶画分では分子量約70kDのタンパク質、膜画分では分子量約66kD,60kD,54kDの3種のタンパク質がCD45と特異的に結合することが明らかとなった。次に、CD45と特異的に結合する4種類のタンパク質がCD45のPTP活性にどのような影響を与えるかの調べた結果、可溶画分から調製したタンパク質のみがCD45のPTP活性を上昇(150%)させることが示された。
膜画分由来のCD45と特異的に結合するタンパク質がどの脾細胞集団に由来するのかを検討するために、ビオチン化CD45とThy-1によるFACS解析を行った。その結果、マウス脾細胞のうちT細胞の一部とThy-1抗原を持たない細胞(その多くはB細胞)の一部がビオチン化CD45と結合していることが明らかとなった。これらの結果から、膜画分から、得られたCD45と特異的に結合する分子はT細胞およびB細胞の膜タンパク質由来であることが示唆された。
今後、これらのタンパク質の性状を解析することにより、CD45の詳細な作用機序を解明していきたい。

研究成果

• [文献書誌] Ogimoto, M. et al.: "Negative regulation of apoptotic death in immature B cells by CD45." lnt. lmmunol. 6. 647-654 (1994)
• [文献書誌] Mizuno, K. et al.: "Developmental regulation of gene expression for the MPTP0 isoforms in the central nervous system and the immune system." FEBS Lett.355. 223-228 (1994)
• [文献書誌] Yakura, H. et al.: "The role of protein tyrosine phosphatases in lymphocyte activation and differentiation" Crit. Rev. lmmunol.14. 311-336 (1994)
• [文献書誌] Ariyama, T. et al.: "Assignment of the human protein tyrosine phoshatase, receptor-type, zeta(PTPRZ) gene to chromosome band 7q31.3" Cytogenet. Cell Genet.70. 52-54 (1995)
• [文献書誌] Ogimoto, M. et al.: "Antigen receptor-initiated growth inhibition is blocked in CD45-loss variants of amature B lymphoma, with limited effects on apoptosis." Eur. J. lmmunol.25. 767-770 (1995)
• [文献書誌] Katagiri, T. et al.: "Selective regulation of Lyn tyrosine kinase by CD45 in immature B cells." J. Biol. Chem.270. 27987-27900 (1995)