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【目的】ビトロネクチン分子のコンフォメーション変化によるコラーゲン結合活性の増強が、肝線維化成立にどのように関わるかを解明する目的で研究を行なった。本年度の実施計画はコラーゲン結合型ビトロネクチンの酵素免疫測定法を確立する事である。
【方法】酵素免疫測定法は以下の様な方法で行なった。ヒト肝臓に存在するI型コラーゲンをマイクロタイタ-プレートに固層しサンプルを添加、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)標識抗ビトロネクチンモノクローナル抗体[M4]を加えインキュベートした。B/F分離後、固層に結合したHRP酵素活性を定量しコラーゲン結合型ビトロネクチンとした。
【結果】コラーゲン結合型ビトロネクチンの酵素免疫測定法ではヒト血漿由来でヘパリンアフィニィティカラムにて精製したビトロネクチンを標準として、2μg/mlまで直線性を示した。健康成人でのコラーゲン結合型ビトロネクチンの血漿濃度は平均で2.2±0.2μg/ml程度であった。慢性非活動性肝炎、慢性活動性肝炎、肝硬変、肝硬変合併肝細胞癌ではそれぞれ平均3.9±0.6、3.9±0.3、5.8±0.8、4.1±0.3μg/mlであった。また、総ビトロネクチンに対するコラーゲン結合型の割合は病態の進行に伴なって有意に増加した。
【まとめ】血漿中に存在するコラーゲン結合型ビトロネクチンの酵素免疫測定法を確立し、精度よく定量が可能になり、本年度の目的はほぼ達成した。慢性肝疾患では血漿ビトロネクチン濃度は減少するにもかかわらず、コラーゲン結合型は増加する成績も得た。来年度はコラーゲン結合型ビトロネクチンが線維増生にどうかかわるかを臨床的に明らかにする予定である。
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