尿細管上皮細胞における炭酸脱水酵素発現動態に関する研究

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06670826
• 研究機関: 慶応義塾大学
• 研究代表者: 佐藤 清二 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (80146638)
• 研究分担者: 上牧 務 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (50224671) ; 奥山 虎之 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (40177192)
• キーワード: 炭酸脱水酵素 / 近位尿細管性アシドーシス

研究概要

尿中炭酸脱水酵素II型、IV型を正常対照7名、純型近位尿細管性アシドーシス患者1名で検討した。24時間蓄尿を遠心(100,000×g)、膜分画と可溶性分画に分離し、各分画中の炭酸脱水酵素II型、IV型を酵素活性測定と蛋白検出(ウエスタンブロッテイング)で検討した。
1.正常対照での検討成績
(1)膜分画
ウエスタンブロッテイング;炭酸脱水酵素II型は29-kDa、炭酸脱水酵素IV型は35-、18.0-、16.8-kDaのバンドとして検出された。
酵素活性;炭酸脱水酵素II型 0.52±0.30 Units/mg protein(n=7)
炭酸脱水酵素IV型 0.21±0.11 Units/mg protein(n=7)
(2)可溶性分画(ウエスタンブロッテイング)
炭酸脱水酵素IV型は35-、33.7-kDaのバンドとして検出された。
2.純型近位尿細管性アシドーシス患者での検討成績
(1)膜分画
ウエスタンブロッテイング;炭酸脱水酵素II型は29-kDaの位置に正常対照と同等のintensityで検出された。炭酸脱水酵素IV型は正常対照と同じ位置に非常に弱いintensityで検出された。
酵素活性;炭酸脱水酵素II型 0.38 Units/mg protein
炭酸脱水酵素IV型 0.02 Units/mg protein
(2)可溶性分画(ウエスタンブロッテイング)
炭酸脱水酵素IV型は正常対照と同じ位置に極めて強いintensityで検出された。
[考察]今回検討した純型近位尿細管性アシドーシス患者では、炭酸脱水酵素IV型の細胞膜へのanchoringの異常が推測される。炭酸脱水酵素IV型と同様にPIGtailでbrush borderにanchoringするアルカリホスファターゼの発現が正常であったので、本患者では、炭酸脱水酵素IV型の微細な異常によるanchoringの障害が示唆される。炭酸脱水酵素IV型遺伝子の解析を行う予定である。