PCR-RFLP法を用いた色素性乾皮症患者および保因者の診断

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06670864
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 上田 正登 神戸大学, 医学部・附属病院, 講師 (20176598)
• キーワード: 色素性乾皮症 / XPA遺伝子 / PCR-RFLP法 / 遺伝子診断 / 羊水診断 / p53

研究概要

色素性乾皮症(xeroderma pigmentosum: XP)のA群患者の原因遺伝子XPAの解析より日本人XPA群患者の多くが3種類の点突然変異の組み合わせにより発症することが示された。これらの変異は3種類の制限酵素AlwNI, HphI, MseIによる新しい切断部位を作り出すため、患者のリンパ球由来DNAのXPA遺伝子をPCR法にて増幅後3種の制限酵素にて消化する事で診断を行うことが可能となった。本研究の目的はこのPCR-RFLPを用い、(1)XPA群患者および保因者の同定を行い、(2)症状と遺伝子変異の種類との関連を明らかにし、更に(3)遺伝子変異の異なるXPA群培養線維芽細胞を用いて種々の光生物学的効果を検討することにある。平成7年度の研究により以下の知見が明らかになった。
1.平成6年度の研究の結果、5名のXPA群患者で変異の同定が不可能であったが、DNAの精製をさらに行なった後同様の実験を行い、点突然変異を同定した。その結果17名のXPA群患者中12名がAlwNI変異のホモ接合体、4名はAlwNI変異とHphI変異のヘテロ接合体、1名がAlwNI変異とMseI変異のヘテロ接合体であった。3名の兄弟のうち2名は保因者、1名は非保因者であった。
2.XPA群患者を第一子に持つ母親が第二子を妊娠したため羊水診断を行なった。羊水細胞のDNAでPCR-RFLP法を行なったところAlwNI変異のホモ接合体であった。
3.癌抑制遺伝子蛋白p53はDNA修復、細胞周期、アポトーシスに重要な役割を担っている。HphI変異を有する患者はそうでない患者に比べ軽度な臨床症例を示す事を平成6年同研究で明らかにした。平成7年度の研究では種々の変異を有するXPA細胞間でUVBで誘導されるp53蛋白の発現に違いがあるか否かをウエスタンブロット法で検討した。その結果HphI/AlwNIヘテロ接合体の細胞では、AlwNIホモ接合体あるいはAlwNI/MseIヘテロ接合体の細胞に比しUVBによるp53蛋白の誘導は軽度でむしろ正常に近い発現を示した。

研究成果

• [文献書誌] M. Ueda: "Expression of retinoblastoma protein in epidermis is induced by UVB exposure" British Journal of Dermatology. (in press).
• [文献書誌] M. Kanoko: "Overexpression of p53 protein is a late event in melanoma progression" Journal of Dermatological Science. (in press).
• [文献書誌] M. Kondoh: "Correlation of the clinical manifestations and gene mutations of Japanese xeroderma pigmentosum group A patients" British Journal of Dermatology. 133. 579-585 (1995)
• [文献書誌] T. Bito: "Cyclin D and retinoblastoma gene product expression in actinic keratosis and cutaneous sguamous cell carcinoma in relation to p53 expression" Journal of Cutaneous Pathology. 22. 427-434 (1995)
• [文献書誌] M. Ueda: "Analysis of v-Ha-ras and v-fos oncogene transduction into a mouse epidermal cell line with "intiated" phenotype in culture but normal skin phenotype in vivo" Molecular Carcinogenesis. 13. 96-103 (1995)
• [文献書誌] T. Bito: "Reduction of ultraviolet-induced skin cancer in mice by topical application of DNA excision repair enzymes" Photodermatology, Photoimmunology and Photomedicine. 11. 9-13 (1995)
• [文献書誌] 上田 正登: "臨床DNA診断法(皮膚腫瘍)" 金原出版, 2 (1995)