ヒト肥満者β_3-アドレナリン受容体m-RNAの組織分布解明に関する研究

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06671044
• 研究機関: 京都府立医科大学
• 研究代表者: 吉田 俊秀 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (60079770)
• キーワード: β_3-アドレナリン受容体m-RNA / 白色脂肪細胞 / 褐色脂肪細胞 / 肥満者 / 健常者 / ノーザンブロット法 / RT-PCR法

研究概要

ラットやマウスでの従来の成績から、β_3-アドレナリン受容体作動薬の主な標的細胞は褐色並びに白色脂肪細胞である事が知られている。そこでまず、ラットとマウスの褐色脂肪組織のβ_3受容体の検出を、ノーザンブロット法で試みた。即ち、β_1、β_2及びβ_3各受容体cDNAのヌクレオチド配列を参考にして、それぞれ約600、300及び310bpのcDNAプローブを作製し、総RNAについて分析した。しかし、β_1以外のシグナルについては極めて弱く100μgRNAでも検出できなかった。そこで次に、総RNAからmRNAのみを分離し10μgを分析したところ、三者とも検出でき、量的にはβ_1>>β_3=β_2であった。
次に、ヒトβ_3受容体を検討する為に、京都府立医科大学婦人科教室・第二外科教室・泌尿器科教室の協力のもと、術前に本研究の趣旨に納得して『摘出標本の一部を医学研究の為に提供する事に同意する』旨の同意書にサインしていただいた患者38名(BMI26.4以上の肥満者13名を含む)から、脂肪組織を術中摘出し液体窒素にて凍結保存した。これらより、mRNAを分離してノーザンブロット法を試みたが、全くシグナルが見られなかった。そこで、より感度の高いRT-PCRを試みた。すなわち、RNA1μgを逆転写酵素によりcDNAにした後、β_3受容体cDNAに特異的な二種類のプライマー(cgagatggctccgtggcctcac,cccaagggccaatggccagtcagcg)を用いてPCRを30サイクルかけた。PCR産物をアガロースゲル電気泳動したところ、予想された約310bpの位置に明確なバンドが認められた。このバンドは2名の肥満症例にて弱かったが、他の全てのサンプルで検出され、しかもマウスのサンプルとも同じであった。これらの結果は、ヒト脂肪組織にもβ_3受容体が存在する事を示しており、これに特異的な作動薬の有用性を示唆するものである。尚、定量的RT-PCR解析には適切な内部標準RNAの開発が必要であり今後の課題である。

研究成果

• [文献書誌] YOSHIDA,T.et al.: "Effect of CL316,243,a novel β_3-adrenoceptor agonist,on insulin secretion in perfused mouse pancreas" Endocrine Journal. 41. 671-675 (1994)
• [文献書誌] 吉田 俊秀 他: "β_3受容体作動薬投与による白色脂肪組織中への褐色脂肪細胞の出現:分子生物学的及び形態学的検討" 第68回日本内分泌学会学術総会講演会(1995年6月2日). (1995)
• [文献書誌] 宮崎玲子・吉田秀俊 他: "ヒトβ_3アドレナリン受容体抗体の作製と胆慶内皮細胞でのβ_3受容体の発現" 第68回日本内分泌学会学術総会講演会(1995年6月3日). (1995)
• [文献書誌] 坂根直樹・吉田俊秀 他: "β_3アドレナリン受容体作動薬の慢性投与は脂肪組織でのβ_3受容体のup regulationを引き起こす" 第68回日本内分泌学会学術総会講演会(1995年6月3日). (1995)
• [文献書誌] YOSHIDA,T.et al.: "Ectpic expression of a thermogenic protein,VCP,in mice treated with a β_3-adrenoceptor agonist,CL316,243" 77th Annual Meeting of The American Endocrine Society(1995年6月14-17日). (1995)
• [文献書誌] 坂根直樹・吉田俊秀 他: "寒冷曝露はβ_3アドレナリン受容体を増加させる" 第32回日本臨床代謝学会講演会(1995年4月21日). (1995)