活性酸素による糸球体障害の多様性:活性酸素の画像化による解析

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06671126
• 研究機関: 筑波大学
• 研究代表者: 青柳 一正 筑波大学, 臨床医学系, 講師 (40114029)
• 研究分担者: 永瀬 宗重 筑波大学, 臨床医学系, 講師 (10189128)
• キーワード: Nephrotic Syndrome / free radical / phorbol myristate / glomerulus / Puromycin Aminonucleoside / heparin / protein kinase C / methylguanidine

研究概要

活性酸素が変性性疾患や慢性炎症性疾患において発症,悪化原因と成っている. 申請者は尿毒症起因物質メチルグアニジン(MG)が,クレアチニンと活性酸素(ハイドロキシルラジカルに特異的)が反応し産生されることを発見し,これを用いてネフローゼ症候群を起こすピューロマイシンアミノヌクレオシド(PA)が実質細胞の活性酸素の増加を起こすことを世界で最初に報告した.今回 Dichlorofluoscene Diacetate(DCFH-DA)をもちいて活性酸素を光に変換し,顕微鏡下で単離組織細胞や糸球体の活性酸素を超高感度テレビカメラで光学的に測定する方法を検討した.DCFH-DAは細胞内に入り,分解してDCFHとなり,過酸化水素や過酸化脂質と反応すると蛍光を発する.申請者は既にこの方法でPAを投与したラットから単離した糸球体が全体に強い光を出すことを報告したが,今回 1.In vitroでの糸球体の活性酸素の増加過程を検討した.正常ラットにDCFH-DAを投与したのち,単離した糸球体にPA添加したところ15分後に単離糸球体あたり2から3個の強い蛍光を発する点が出現し,45分後には糸球体全体に広がっていくことが観察された.2.C-kinaseを活性化し,蛋白尿を生じる phorbal myristate acetate (PMA)を単離糸球体に添加するとPAに比して蛍光は小さな点として出現し,それ以上は広がらなかった.従来,PAによる蛋白尿とPMAによる蛋白尿の出現機構は活性酸素によるものとして一括して考えられていたが,両者の活性酸素の産生部位(細胞)が異なっていることが示唆された.3.ヘパリンは蛋白尿を減少させる.ヘパリンの活性酸素への作用を検討するとPAで増加するMG産生を3.3u/mlより有意に抑制した.一方の腎臓に生理食塩水を,片方にヘパリンを注入したのち単離した糸球体をPAで刺激すると,ヘパリン注入群で光は減弱した.

研究成果

• [文献書誌] 青柳一正: "活性酸素による腎障害--メチルグアニジンを中心として" 腎と透析,. 臨時増刊. 127-134 (1994)
• [文献書誌] AOYAGI Kazumasa: "Imaging Analysis of Reaction Oxygen of Isolated Rat Glomeruli Stimulated by Puromycin Aminonu-cleoside in vitro" Journal of American Society of Nephrology. 4,3. 450-450 (1993)
• [文献書誌] AOYAGI Kazumasa: "Role for Reactive Oxygen in Guanidinosuccinic Acid Synthesis and Identification of Its Precursor" Journal of American Society of Nephrology. 4,3. 763-763 (1993)
• [文献書誌] NAGASE Sohji: "Decreased Serum Antioxidant Activity in Hemodialysis Patients Directly Proved by Electron Spin Resonance Method" Journal of American Society of Nephrology. 4,3. 371-371 (1993)
• [文献書誌] NAGASE Sohji: "Increased Lipid Peroxidation by Rat Liver Mi-crosomes-in Experimental Renal Failure, and Decreased Serum Antioxidant Activity in Hemodialysis Patients proved by This System" Journal of American Society of Nephrology. 4,3. 777-777 (1993)
• [文献書誌] Gotoh Michihiro: "The Oxidizing Stress in End-stage Renal Failure from the Stand point of Lipid Peroxidation of Subcutane-ous Fat Tissue" Journal of American Society of Nephrology. 4,3. 770-770 (1993)
• [文献書誌] 青柳一正: "微小循環-腎 高脂血症による障害" 現代医療. 25(6). 36-40 (1993)
• [文献書誌] 青柳一正: "腎障害,腎不全における活性酸素毒性" nanoGIGA. 2. 2077-2083 (1993)
• [文献書誌] 青柳一正: "尿毒症,ネフローゼ症候群と活性酸素:メチルグアニジンによる解析" TCSC News Letters. 25. 59-64 (1994)
• [文献書誌] 青柳一正: "活性酸素と腎障害 その後の進歩:ピューロマイシン腎症" 腎と透析. 36. 237-240 (1994)
• [文献書誌] 青柳一正: "中毒性腎症:トッピクス:外因性物質,有機毒" 内科学会雑誌. 83. 1762-1766 (1994)
• [文献書誌] 青柳一正: "活性酸素による腎障害とアンギオテンシン変換酵素阻害薬" Mebio,. 11(11). 14-19 (1994)
• [文献書誌] 青柳一正: "漢方薬の活性酸素抑制作用と腎炎,妊娠中毒症治療の可能性" 腎と透析. 37. 941-946 (1994)
• [文献書誌] 青柳一正: "Uremic Toxinに関する最近の知見について" 臨床医. 21(2). 248-245 (1995)
• [文献書誌] 青柳一正: "グアニジノコハク酸に対する漢方製剤の効果" 腎不全,. 6. 93-96 (1994)
• [文献書誌] 青柳一正: "ヘパリンの活性酸素産生抑制作用について" 腎臓. 17. 49-50 (1995)
• [文献書誌] Katsumi Takemura: "Biosynthesis of guanidine in isolated rat hepatocytes, perfused rat liver and intact animals" Nephron. 67. 334-339 (1994)
• [文献書誌] 青柳一正: "活性酸素の単離肝細胞におけるguanidinosuccinic acid産生に対する効果" 腎不全. 5. 113-115 (1993)
• [文献書誌] Kazumasa Aoyagi: "Role for reactive oxygen and argininosuccinate in guanidinosuccinic acid synthesis." Guanidino Compounds.(John Libbey & Compony). (in press).
• [文献書誌] Kazumasa Aoyagi: "Inhibition of methylguanidine synthesis in isolated rat hepatocytes by protein kinase C inhibitor and calmodulin antagonist." Guanidino Compounds.(John Libbey & Compony). (in press).
• [文献書誌] Katsumi Takemura,: "Methylguanidine synthesis in rat liver peroxisomes." Guanidino Compounds.(John Libbey & Compony). (in press).
• [文献書誌] Nagase S,: "Decreased serum antioxidant activity in haemodialysis patients increased by methylguanidine synthesis as a per oxidative marker." Guanidino Compounds.(John Libbey & Compony). (in press).
• [文献書誌] 青柳一正: "腎とフリーラジカル 第2版(東京医学社) 104-106" 腎炎モデルに有効な生薬処方TJ8014の活性酸素の抑制作用とその有効構成成分の検討, 284 (1994)
• [文献書誌] 永瀬宗重: "腎とフリーラジカル 第2版(東京医学社) 185-187" マイクロゾームの過酸化傾向に関する研究, 284 (1994)
• [文献書誌] 青柳一正: "腎とフリーラジカル 第2版(東京医学社) 76-77," 単離糸球体のピューロマイシン アミノヌクレオシド(PA)による活性酸素の産生:活性酸素の画像化による研究(IN VITRO), 284 (1994)
• [文献書誌] 青柳一正: "腎とフリーラジカル 第2版(東京医学社) 107-108," Puromycin Aminonucleosideで増加する活性酸素のグルココルチコイドによる抑制, 284 (1994)
• [文献書誌] 青柳一正: "腎とフリーラジカル 第2版(東京医学社) 153-155" Uremic toxinであるグアニジノコハク酸(GSA)は肝臓の活性酸素のマーカーとなるか, 284 (1994)
• [文献書誌] 青柳一正: "腎とフリーラジカル 第2版(東京医学社) 78-79" ピューロマイシン アミノヌクレオシド投与ラットの糸球体の活性酸素の産生部位:画像化による解析, 284 (1994)