ヒッペル・リド-病の腫瘍抑制遺伝子を用いた遺伝子診断及び遺伝子産物に関する研究

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06671410
• 研究機関: 横浜市立大学
• 研究代表者: 管野 洋 横浜市立大学, 医学部, 助手 (40244496)
• 研究分担者: 矢尾 正祐 横浜市立大学, 医学部, 講師 (00260787) ; 執印 太郎 高知医科大学, 医学部, 教授 (80179019) ; 山本 勇夫 横浜市立大学, 医学部, 教授 (30158266) ; 藤井 聡 横浜市立大学, 医学部, 助教授 (90173385)
• キーワード: フォン・ヒッペル・リンド-病 / 腫瘍抑制遺伝子 / 遺伝子診断 / 遺伝子産物 / 遺伝病 / 母斑病 / 血管芽腫 / 遺伝性脳腫瘍

研究概要

全国の大学、病院に協力を頂き、本邦に約100家系あると推定されるvon Hippel-Lindau(VHL)病の家系の血液を70家系以上集め、これよりDNAを抽出し、VHL腫瘍抑制遺伝子の分析に供した。分析方法は、VHL腫瘍抑制遺伝子を構成する3つのエクソンについて、single strand conformational polymorphism(SSCP)解析を行い、異常の泳動パターンが認められた家系のDNAについては、direct sequence法にて塩基配列の解析を行った。また、SSCP解析にて異常が認められなかったVHL病の家系のDNAについては、southern blot法にて解析を行った。この結果、分析を終了した52家系のうちSSCP解析にて22家系に、southern blot法により、3家系、計35家系に遺伝子の変異を認めた。遺伝子変異様式は、アミノ酸の置換(missense変異)21家系、欠失が9家系、挿入が3家系、スプライス部位の変異が2例であった。欧米の報告と異なり、nonsense変異はみられなかった。また、散発性の血管芽腫および腎癌の組織においても、同様の解析を行った結果、VHL腫瘍抑制遺伝子の変異と3p25-26領域を中心にヘテロ接合性の消失を約70%に認めただけでなく、神経膠腫においても少数ながらこの遺伝子変異と3pのヘテロ接合性の消失を認め、神経膠腫の発生にもこの遺伝子が関与していると考えられた。さらに、この遺伝子の発現をin-situ hybridization法にておこなったところ、大脳、小脳、脳幹、脊髄の神経細胞に発現を認め、さらにこの遺伝子産物に対するモノク-ナル抗体を用いた免疫染色で神経細胞と血管芽腫、神経膠腫の腫瘍細胞において発現を認めた。

研究成果

• [文献書誌] Kanno H.Shuin T,Kondo K,et al: "Somatic mutations of the von Hiippel-Lindau tumor sappressor gene and loss of heterozygosity on chromosome 3p in human glial tumors" Cancer Research. (発表予定). (1997)
• [文献書誌] 管野洋: "脳病変とvon Hippel-Lindau病" 病理と臨床. 15・2. 129-133 (1997)
• [文献書誌] Kanno H.Shuin T,Kondo K,et al: "Molecular genetic diagnosis of von Hippel-Lindou disease Analysis of five Japaneses families" Japanese Journal of Cancer Research. 87. 423-428 (1996)
• [文献書誌] Clinical Research Group for VHL in Japan Shuin T.Yao M.Kanno H et al: "Germline mutations in the von Hippel-Lindau disease (VHL) gene in Japaneses VHL" Human Molecular Genetics. 4・12. 2233-2237 (1995)
• [文献書誌] Kanno H.Kondo K.LtoS.et al: "Somatic mutations of the von Hippel-Lindau tamor suppressor gene in sporadic central nerrous system hemangioblastomas" Cancer Research. 54. 4845-4847 (1994)
• [文献書誌] Shuin T.Kondo K.Torigoe S. et al: "Frequent somatic mutation and loss of heterozygosity of the von Hippel-Lindau tumor sappressor gene in primary human renal carcinomas" Cancer Research. 54. 2852-2854 (1994)