ヒト精漿中イムノグロブリン結合因子の分子構造および生理機能の解明

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06671655
• 研究種目: 一般研究(C)
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 鎌田 正晴 徳島大学, 医学部, 講師 (60145018)
• 研究分担者: 二木 史郎 徳島大学, 薬学部, 助教授 (50199402)
• キーワード: イムノグロブリン結合因子 / 精漿 / 抗精子抗体 / 子宮頸管腺 / 気管 / 蛋白分解酵素 / トリプターゼ / アルギニールエンドペプチダーゼ

研究概要

主任研究者らが、ヒト精漿中に見い出したイムノグロブリン結合因子(IgBF、immuno-globulin binding factor)は、PWM刺激リンパ球幼若化反応を強く阻害することから、精子に対する抗体産生を抑制していると考えられる。しかし精漿から純化したIgBFは、不活性なhomodimerであり、in vivoでは、作用発現部位における、還元酵素や蛋白分解酵素等による活性化機構の存在が示唆される。そこで本研究では、IgBFの局在、分子構造および活性発現の機構を検討し、以下の結果を得た。
(1)IgBFに対する単クローン性抗体を作成し、それを利用して従来のRIA法の約400倍の感度を持つELISA法を開発した。同法および免疫組織学的検討により、IgBFは、前立腺以外にも、子宮頚管腺および気管分泌腺から多量に分泌されることが判った。その他、涙腺や唾液腺からも分泌されると考えられた。
(2)ヒト精漿から2つのIgBFサブタイプを精製した。2つのサブタイプは、還元カルボキシメチル化によっても、逆相クロマトグラフィーで異なる溶出パターンを示したが、N末端から39残基のアミノ酸配列およびアミノ酸組成は全く一致していた。すなわちこの2種のサブタイプの差は、分子内S-S結合の差ではなく、ごく一部のアミノ酸残基の差であると考えられた。また還元カルボキシメチル化されたIgBFは、いずれも抗Leu-11b抗体と反応せず、活性発現にはSH基の存在が必要と考えられた。
(3)IgBFを、唾液腺由来の酵素であるarginilendopeptidaseおよびT細胞由来の酵素であるtryptase TL1で分解することにより、非還元下でLeu-11-bと反応する、分子量15kDの活性型IgBFが発現した。すなわち、蛋白分解酵素によるarg-Xの加水分解というIgBFの活性化機構が明らかとなった。

研究成果

• [文献書誌] Kamada M.: "Detection of immunoglobulin binding factor by enzyme-linked immunosorbent assay using two monoclenal atibodies." Biochem.Mol.Biol.Int.34. 837-844 (1994)
• [文献書誌] Jaismal Y.K.: "Immunoglobnlin binding factous of buman seninal plasma" Mol.Androl.(in press).
• [文献書誌] Hirano M.: "Significance of immuno globulin binding factor as the sperm coating antigen." Proceedings of the 9th Annual Meeting of Japan Society for Immunobgy of Reproduction.(in press).
• [文献書誌] Takikama M.: "Comylement inhibiting factor in haman seminal plasma and somen onalysis." Proceedings of the 9th Annual Meeting of Japan Society for Immunobgy of Reproduction.(in press).
• [文献書誌] Yamamoto S.: "IL-1α induces inducible nitric oxide synthase in vterine myometrium." Proceedings of 9th Annual Meeting of Japan Society for Immunobgy of Reproduction.(in press).