GnRH分泌細胞のGnRH分泌,特に律動的GnRH分泌に関する電気生理学的研究

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06671672
• 研究種目: 一般研究(C)
• 研究機関: 横浜市立大学
• 研究代表者: 植村 次雄 横浜市立大学, 医学部, 助教授 (40046040)
• 研究分担者: 山口 肇 横浜市立大学, 医学部, 助手 (30254212) ; 白須 和裕 横浜市立大学, 医学部, 講師 (60171047)
• キーワード: GnRH分泌細胞 / GnRH律動的分泌 / patch clamp / multiple unit activiry / Caイオン

研究概要

<研究の目的>transgenic mouseより得たGnRH cell lineを用いて、in vitro実験によりGnRH律動的分泌のpulse generator及びGnRH分泌調節機構を直接多ニューロン発射活動(MUA)法やpatch clamp法の電気生理学的手法により解明することを目的とする。
<実験方法>(1)電気活動の記録:patch clamp pippttesガラス電極を用いて、透過型顕微鏡下に培養細胞付着Falcon dishを置き、whole cell patch clamp用増幅器を用いて、dish付着細胞の膜電位を測定した。multiple unit activiry(MUA)の記録には2-5μm径の微小ガラス電極を用いてGnRH cell細胞群の活動電位の変化を測定する。信号波形は適当な大きさのものをpulse counter測定した。
(2)Cytodex 1 beads付着細胞をミニカラムに充填し、潅流実験をおこなった。またfura-2AMを用いて細胞内[Ca^<2+>]iをdigital imaging microscopic systemで測定した。
<研究成績>1)Noradrenaline(NA)0.1μM,1.0μM投与でGnRH分泌は用量依存性に増加した。一方、NA1.0μMの持続潅流で細胞内[Ca^<2+>]iは投与前の275±24%(Mean±SE)に増加した。
2)current-clamp条件下でNA投与では0.1μMではresting potentialは不変であるが、NA1.0μMでdepolarizationが認められ、投与中その程度は進行した。NAの投与終了後resting potentialは投与前のレベルに復元した。
3)MUAについては無処置で持続的電気活動の記録を現在実行中である。

研究成果

• [文献書誌] Uemura,T.et al.: "Direct effects of gonadotropin-releasing hormone on the ovary in rats and humans" Horm Res. 41(Suppl.1).7-13. (1994)
• [文献書誌] Uemura,T.et al.: "Effect of gonadotropin-releasing hormone agonist on the bone mineral density of patients with endometriosis." Fertil Steril. 62. 246-250. (1994)
• [文献書誌] Uemura,T.et al.: "A classification of women with hypothalamic progestagen-negative amenorrhea" International Journal of Gynecology & Obstetrics. 46(Suppl 1).157.- (1994)
• [文献書誌] 植村次雄,段泰行.: "GnRH analogの婦人科腫瘍への応用." 産と婦. 61. 347-352 (1994)
• [文献書誌] 植村次雄.: "GnRH誘導体の排卵誘発、IVFへの応用." 産と婦. 61. 1143-1448 (1994)
• [文献書誌] 植村次雄,遠藤方哉.: "GnRHの卵巣への直接作用." Hormone Frontier in Gynecology. 1. 53-60. (1994)
• [文献書誌] Uemura,T.et al.: "Frontiers in Endocrinology Vol4;Prospectives on Assisted Reproduction." Rome:Ares-Serono Symposia,749 (1994)
• [文献書誌] 植村次雄(共著): "産婦人科学書1、生殖医学" 金原出版, 862 (1994)