| 研究課題/領域番号 |
06671687
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
産婦人科学
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| 研究機関 | 慶応義塾大学 |
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研究代表者 |
末岡 浩 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (90162833)
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| 研究分担者 |
橋場 剛士 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (60245553)
浅田 弘法 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (60231883)
久慈 直昭 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (80169987)
小林 俊文 慶應義塾大学, 医学部, 助教授 (30051460)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1995
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| キーワード | EPF / ロゼット抑制反応 / SDS-PAGE / 糖タンパク / Western blot / Thioredoxin / 逆相HPLC / Chaperonin 10 |
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| 研究概要 |
妊娠早期、とくに着床以前の超早期(受精後48時間以内)に出現し、second trimesterまで持続して検出される糖タンパクである初期妊娠因子early pregnancy factor(EPF)の本態を追求するために完全精製を試みてきた。EPFの完全構造解析のために、これまでに抽出したタンパクから、とくにペプチドのC末端アミノ酸配列を決定し、さらにこの物質の妊娠成立機構を含めた生体内での役割を解明することが本研究の目的である。最近、Clarke et al.によってヒト胎盤の抽出液から精製し、N末端のアミノ酸6残基の配列がThioredoxin(ADF)の一致していたことを報告したため、これまでに我々が精製したタンパクとの相同性について検討し、生化学、生物活性、免疫的にも全く異なる物質であることを証明した。また、EPFの発見者であるMorton,H.は、我々が精製したタンパクに、生化学的特性の極めて類似したタンパクChaperonin 10 相同タンパクを抽出し、Clarke et al.の抽出したタンパクとは同様に異物質であることを確認した。
逆相 HPLCによる抽出分画がTrifluoroacetateの処理によってロゼット抑制反応におけるEPF生物活性が失活するため、SDS-PAGEのbandからの切り出し抽出物質を再度逆相HPLC分析した結果との比較より、N末端の13残基のアミノ酸構造解析に成功した。しかし,リジン切断法によるC末端側のアミノ酸構造解析は量的問題とリジン末端の可能性から分析が困難となった。
合成ペプチドを作製し、ポリクローナル抗体を作製し、これを用いてWestern blotを行なった。Dot blotでの確認および、抗体の生物活性の抑制結果を得たが、Western blotによる分子量の確認は困難であった。
そこで現在、従来の抽出法に加え抗体によるアフィニティカラムおよび高感度Western blot法により再度大量抽出を試み、さらに機能の向上したペプチド配列分析機を用いて分析を進行中である。
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