PCRによるレンサ球菌感染症の迅速診断法

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06671815
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 小野 恒子 徳島大学, 歯学部, 講師 (40035514)
• 研究分担者: 根本 謙 徳島大学, 歯学部, 助手 (10218274) ; 弘田 克彦 徳島大学, 歯学部, 助手 (60199130) ; 三宅 洋一郎 徳島大学, 歯学部, 教授 (80136093)
• キーワード: oral streptococci / PCR診断 / spaP / S.mutans / bacteremia

研究概要

前年度に引き続き,口腔内連鎖球菌による敗血症,心内膜炎,嚥下性肺炎等の重篤な感染症を予防するため,主要な菌種の正確かつ迅速な検出法について検討した.特に齲蝕原性細菌として重要なS.mutansについて血液中より検出する方法としてPCR診断法を検討した.S.mutans菌体表層抗原AgI/IIの構造遺伝子spaPの塩基配列を基に本菌種特異的と推定されるオリイゴヌクレオチドプローブを作成し,mutans group,その他の連鎖球菌,他の口腔内細菌標準株および歯垢由来のS.mutans臨床分離株,その他ミュータンス群連鎖球菌についてDNA粗標品を鋳型としてPCRを行ったところ,S.mutansのみ菌種特異的な約200bpのPCR産物が得られた.本反応における検出感度は粗DNA標品の場合4〜40菌浮遊液および精製DNA標品0.3pgであり,きわめて感度は高いことが分かった.さらに,実験的に菌血症を発症させたS.mutans感染マウスより血液を採取,本反応による検出を行ったところ,本菌投与3日後までPCR産物が得られた.
以上の結果から,口腔内連鎖球菌の中で,S.mutansについては極めて高感度にかつ特異的に検出できることから,本菌による敗血症,心内膜炎などの迅速診断法として有用であることが明らかとなった.
他の口腔内連鎖球菌の中で特に心内膜炎あるいは肺炎患者等において検出頻度の高いS.sanguis, S.oralis, S.milleri等についても特異的プローブの検索中であり,これらの混合プローブ使用によりさらに簡便な複数菌の診断に利用できると考えている.

研究成果

• [文献書誌] Tsuneko Ono, et al.: "Cloning and expression of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase gene in Escherichia coli and Bacteroides uniformis." FEMS Microbiology Letters. 121. 153-158 (1994)
• [文献書誌] Shigeru Akimoto, et al.: "Complete sequence of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase-encoding gene." Biochem. Biophys. Res. Comm.203. 914-921 (1994)
• [文献書誌] Tsuneko Ono, et al.: "Detection of Streptococcus mutans by PCR amplification of spaP gene." J. Med. Microbiol.41. 231-235 (1994)
• [文献書誌] Mahfuzur R. Sarker, et al.: "Molecular Cloning of the leuB gene from Bacteroides fragilis by functional complementation in Escherichia coli." Microbiol. Immunol.39. 19-25 (1995)
• [文献書誌] Yoichiro Miyake, et al.: "In vitro activity of tetracyclines, macrolides, quinolones, clindamycin and metronidazole against periodontopathic bacteria." J. Periodont. Res.30. 290-293 (1995)
• [文献書誌] Katsuhiko Hirota, et al.: "Cross-reactivity between human sialyl Lewis^X oligosaccharide and common causative oral bacteria of infective endocarditis." FEMS Immunol. Med. Microbiol.12. 159-164 (1995)