| 研究概要 |
本研究においては,蛋白結合におけるアニマルスケールアップの信頼性向上を目的として,ヒト血清アルブミンにおける立体構造及び薬物結合性データを基に,薬物の血清アルブミン結合における種差について検討を行った結果,以下の知見を得た.
1)各種サイトl結合リガンド間の置換現象の結果から,ヒト血清アルブミン分子上のサイトlは,3つのサブサイト(それぞれ,サブサイトla,lb,及びlc)から構成される幅広い領域であることが示された.
2)示差走査熱量測定により、熱変性時における転移温度及び転移エンタルピーを求めた結果,イヌ及びウサギ血清アルブミンは立体構造の揺らぎが大きく,熱変性の際は各ドメインが異なった挙動を示し,多状態転移をとることが明らかとなった.一方,ヒト,ウシ及びラットの場合,立体構造の揺らぎが小さく,イヌやウサギに比べ秩序だった構造をしていると考えられた.
3)従来からN-B転移が明らかにされているヒト血清アルブミンと,その発現が疑問視されているラット血清アルブミンを取り上げ,NMRスペクトル法によりN-B転移を検討したところ、ヒスチジンを取り巻く環境の変化に加え,pH依存性のコンフォメーション変化を惹起することが明らかとなった.また,各コンフォメーションにおける安定性をDSCにより測定したところ,B型において揺らぎの増大が観察された.
4)各種アルブミン分子上における薬物間の相互作用を競合的,協同的及び独立的結合モデルに基づいて解析したところ,動物種アルブミンにおいてもヒトと同様,複数の薬物結合サイトが存在することが示唆された.
目下,リコンビナントヒト血清アルブミンを作成中であり,調整次第,薬物結合性を調べ,本研究の所期の目的である薬物結合サイトの微環境解析,加えて薬物の肝取り込みにおけるN-B転移の関与について調べる予定である.
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