| 研究課題/領域番号 |
06672207
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| 研究機関 | 新潟薬科大学 |
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研究代表者 |
宇田 裕 新潟薬科大学, 薬学部, 教授 (90013937)
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| 研究分担者 |
斎藤 麻由 新潟薬科大学, 薬学部, 助手 (70235076)
白石 隆幸 新潟薬科大学, 薬学部, 助教授 (40110663)
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| キーワード | シアリダーゼ / アミノペプチダーゼ / アマスタチン |
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| 研究概要 |
ヒト胎盤シアリダーゼが酸性条件下37℃でインキュベーションを行うと著しい活性化を受ける。著者らは先にこの活性化現象がアミノペプチダーゼAの阻害剤であるアマスタチンによって阻害を受けることから、プロテアーゼの関与する可能性を示した。今回、この活性化にプロテアーゼがどのように関与しているのか確かめる目的で、プロテアーゼの分離を試みる一方、活性化に関与する因子についてさらに詳細な検討を行った。
アミノペプチダーゼA活性について、グルタミン酸アミノペプチダーゼおよびロイシンアミノペプチダーゼの両活性を指標にヒト胎盤よりプロテアーゼの分離を試みた。糖たんぱく質画分のセファデックスG-200ゲルろ過により二つのピークが観察され、それらの画分はいずれも両アミノペプチダーゼ活性を示すものの、その比は大きく異なっていた。また、両酵素の至適pHはいずれも7付近にあり、これはシアリダーゼの活性化における至適pH5.0とは異なっていた。しかしながら両プロテアーゼ共に非常に不安定で精製が困難であり、精製酵素を用いたシアリダーゼ活性化への関与について確かめるまでには至っていない。
一方、シアリダーゼの活性化に関与する因子について、緩衝液、陽イオン、陰イオン、アミノ酸などによる影響を調べたところ、陰イオン特に塩素イオンによって濃度依存的に活性化が促進されることを見いだした。また、アマスタチン(塩酸塩)は低濃度ではシアリダーゼの活性化に促進的に作用することが解り、アマスタチンのシアリダーゼ活性化における影響はプロテアーゼ阻害に止まらない複雑な作用を持つことが明らかになった。現在、シアリダーゼ活性化機構については更に詳細な検討を行っている。
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