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タンパク質の輸送小胞の一つであるCOP被服小胞の形成に必須の複合タンパク質、coatomerのサブユニットのうち、_ε-COPおよびζ-COPについて以下のことを行なった。
(1)_ε-COP
昨年、牛肝臓cDNAライブラリーよりクローニングした_ε-COPのcDNAを利用して、cDNAのN-末端側にヒスチジン6個を付加したものを哺乳動物細胞の発現系に導入し、_ε-COPを大量発現する形質転換CHO細胞をクローニングした。この細胞を大量培養し、メタボリックラベルした後、ニッケルカラムを利用して、ラジオラベルcoatomerの精製に成功した。得られたラジオラベルcoatomerをゴルジ膜とARFと共にインキュベーションし、蔗糖密度勾配遠心分離法でCOP被服小胞を、無細胞系で調製したところ、すべてのラジオラベルcoatomerサブユニットがCOP被服小胞に組み込まれた。したがって、coatomerの各サブユニットはCOP被服小胞の各コートタンパク質と同一タンパク質であることが明白となった。
(2)ζ-COP
coatomerのサブユニットの一つであるζ-COPのcDNAを_ε-COPと同様に牛肝臓cDNAライブラリーよりクローニングした。このcDNAを利用して、大腸菌で発現したζ-COPを抗原に用いてζ-COPに対する抗体を調製したところ、その抗体は、coatomerのゴルジ膜への結合とCOP被服小胞の形成を阻害した。したがって、ζ-COPはCOP被服小胞の形成に必要なcoatomerのサブユニットの一つであることが明らかとなった。
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