| 研究課題/領域番号 |
06680698
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| 研究機関 | 東京理科大学 |
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研究代表者 |
深井 文雄 東京理科大学, 薬学部, 講師 (90124487)
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| 研究分担者 |
片山 敬 東京理科大学, 保健体育科学センター, 教授 (00013897)
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| キーワード | 脂肪細胞 / 分化 / フィブロネクチン / インテグリン / 接着分子 / 細胞接着 / プロテオグリカン / グリコサミノグリカン |
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| 研究概要 |
ST-13前脂肪細胞の分化をインタクトのFNが抑制するのに対し、FN分子のフィブリン結合ドメイン由来のフラグメント(Fib 1)は逆に分化を強く誘導する作用を有することを我々は見いだした。更に、このFib 1フラグメントによる分化誘導は、フラグメントがST-13細胞に作用して分化誘導活性を有するプロテオグリカンの産生・放出を促したことに基づいた作用であることを示した。そこで本年度、Fib 1フラグメントによってST-13細胞から遊離するプロテオグリカン関連分化誘導因子の本体究明を試みた。
Fib 1フラグメントによって分化を誘導したST-13細胞の培養上清を7M尿素存在下にDEAEグロマトグラフィーを2回繰り返した後、更にSepharose 4Bによるゲル濾過によって分子量300-500kDaのプロテオグリカンを精製した。本標品はウロン酸換算量で50ng/mlでST-13前脂肪細胞の分化を誘導する作用を示し、この活性は本プロテオグリカンをchondroitinaseABC処理することによってほぼ完全に失活した。また、本プロテオグリカンにはPG-M/versicanについて報告されている細胞接着阻害活性は観察されず、更にそのグリコサミノグリカン鎖はコンドロイチン4硫酸を主成分としていたこと等から、PG-M/versicanとは異なる作用機序によってST-13細胞の分化を誘導するものと考えられた。本プロテオグリカンを還元条件下にSDS-PAGEを行なうと分子量70kDa付近に単一のタンパクバンドが出現したことから、グリコサミノグリカン鎖を含まない70kDaのタンパク鎖がジスルフィド結合で繋がった構造をもつものと推測された。この70kDaサブニユットのアミノ末端アミノ酸配列はAsp-Thr-His-Lys-Ser-Glu-Ile-Ala-His-Arg-Phe-Lys-Asp-Lcu-Gly-Glu-Glu-His-Phe-Lys-Gly-Leu-Val-Leu-Ile-Ala-Phe-と決定された。
現在、この配列を含む合成ペプチドに対する抗体の調製を急いでいる。
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