| 研究概要 |
平成6年度は以下の3項目の実験を計画した。
1.アメフラシ神経繊維特異糖脂質FGL-IIbを得る。
2.アメフラシ神経系P2分画をミニ,2次元電気泳動-ウエスタンプロットを行い,抗FGL-IIb抗体と反応させ2次元パターン上43 KDaタンパク質の単一性と性質を観察。
3FGL-IIbと同定されたタンパク質との結合反応をin vitroで証明する。
1.については方法が確立しているので問題がない。
2.の実験につき次の2点改良を加えた。(1),アメフラシ神経組織を界面活性剤で処理,膜成分を溶解する。(2),抗FGL-IIb抗体カラムを使用してアメフラシ神経組織タンパク質の精製。つまり,アメフラシ全神経組織を3種類の界面活性剤(コール酸,トリトンX-100,オクチルグルコシド)を含む溶液に溶解。溶解される量と,糖脂質の回収について観察した。オクチルグルコシド溶液処理が一番溶解性が高く(dry weightにして50%回収),C/M(2:1)抽出した糖脂質のHPTLC展開パターンがきれいだったので,以後,界面活性剤としてオクチルグルコシド(100mM)溶液を使用した。一方において作成しておいた抗FGL-IIb抗体カラムにオクチルグルコシド溶解物をapplyし,オクチルグルコシド濃度を50mMにした溶液で十分洗った後,0.1%SDSで溶出したsampleをSDS-PAGE,銀染色を行った。正常抗体カラムに比較して43KDaタンパクのみが銀染色で濃く染色された。この物についての更なる分析を行う予定である。M.W.より推測してactin抗体と反応させてみたが反応しなかった。3.については手付かずである。
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