| 研究課題/領域番号 |
06680776
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
神経化学・神経薬理学
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| 研究機関 | 東京都立医療技術短期大学 |
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研究代表者 |
笠井 久隆 東京都立医療技術短期大学, 一般教養科, 教授 (80087163)
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| 研究分担者 |
伊藤 尚 青山学院大学, 理工学部・化学科, 教授 (70082815)
須田 治彦 都立医療技術短大, 作業療法学科, 教授 (40051784)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1996
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| キーワード | マストパラン / 生理活性ペプチド / エキソサイトシス / アフィニティークロマトグラフィー / リガンド合成 / 固相合成 / GTPアーゼ |
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| 研究概要 |
アフニティークロマトグラフィーのリガンドとして、マストパランのN末端側1-3残基をLeuに置換すると同時に、C末端がわには樹脂との立体障害を考慮しGlyを伸長させたマストプランアナローグ(LLL-MP-G)をアミノ型樹脂にC末端側から順次伸長する方式でペプチド合成機で合成した。合成されたリガンドは樹脂から切出後アミノ酸組成分析、二重収束質量分析計およびプロテインシークエンサーにて分析したところ、アミノ酸配列および元素組成は理論値とよく一致し、そのペプチドの構造を保持していることが確認された。このリガンドを用いてHPLCタイプのアフニティークロマトグラフィーを検討した。更にウシ大脳より抽出・可溶化した膜タンパク画分中のMPの標的タンパク質の探索を行ったところ、Ca^<2+>存在下においてのみアフニティーリガンドと吸着する分子量26〜40kDa程度のタンパクが、SDS-PAGEによって確認された。このうち26kDaのバンドはゲルから切り出し、Max-yield電気泳動回収装置を用いて回収し、またウエスタンブロッティングにより泳動後のゲルから直接PVDF膜に転写を行った。これら回収画分に対し、アミノ酸組成分析およびプロテインシークエンサーによるタンパク質の一次構造解析を試みた。さらにSephadex G-75あるいはG-150ゲルクロマトグラフィーとアフィニティークロマトグラフィーを併用し、特異的画分の分離も試みた。
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