| 研究課題/領域番号 |
06680819
|
|---|
| 研究機関 | 福岡大学 |
|---|
研究代表者 |
井上 真澄 福岡大学, 医学部, 助教授 (40223276)
|
|---|
| 研究分担者 |
今永 一成 福岡大学, 医学部, 教授 (40078613)
|
|---|
| キーワード | 副腎髄質細胞 / ムスカリン受容体 / 非選択的カチオンチャネル / G蛋白 / 燐酸化 / 脱燐酸化 / Mg^<2+>依存性脱燐酸化酵素 / Ca^<2+> |
|---|
| 研究概要 |
ニスタチン法により副腎髄質細胞の膜電位を-40mVに固定して全細胞電流を記録した。ムスカリン誘発性非選択的カチオン(NS)電流は、Krebs液中では記録20分間減弱することなく繰り返し誘発された。しかし、外液からCa^<2+>を除去すると、36%の細胞において20分後にムスカリン誘発性NS電流は約半分に減少した。このNS電流の減少は、cyclopiazonic acidをCa^<2+>除去液に加えると細胞の73%で観察された。一方、Krebs液中にA-23187を加えると、NS電流は約30%増加した。これらの結果は、細胞内Ca^<2+>が貯蔵部位と細胞質の間を循環する結果、ある程度の細胞内Ca^<2+>濃度が保たれていること、又細胞内Ca^<2+>はNS電流発生に不可欠ではないが、促進的に働くことを示唆する。外液にneomycinを投与すると、ムスカリンで誘発されるCa依存性K電流は時間依存性に減少し、投与15分でほとんど消失した。一方、NS電流はその大きさが33%減少するものの、時間依存性の減少は全くみられなかった。この結果は、NS電流の発生にはphospholipase Cは関与しないことを示唆する。細胞内にG蛋白活性薬のAlF化合物を注入すると、NSチャネルが活性化される。そこで、AlF誘発性NS電流のゆらぎをPower Mac (購入機器)を用いて解析した結果、NSチャネルの単一コンダクタンスは2.5pSであることが分かった。NSチャネルの活性化における燐酸化の関与を細胞内ATPを非加水分解性ATPアナログや他のnucleotideに置換して検討した。細胞内ATPをCN化合物で枯渇した条件下では、NS電流の発生は全くパッチ電極内のATPに依存した。AMP-PNP、ATPγS、GTP、ITP及びUTPは、全くこのATPの作用を持たなかった。これらの結果は、NSチャネル活性化に燐酸化が関与することを示唆する。現在、caged GTPγSの光分解(購入機器)による瞬時の細胞内GTPγSの増加が、受容体刺激により誘発されるNS電流にどう影響するかを調べ、脱活性化機構のG蛋白依存性をさらに検討している。
|
