下垂体腺腫における下垂体ホルモンmRNAの細胞内動態とホルモン産生能に関する研究

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06771063
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 松野 彰 東京大学, 医学部(病), 文部教官助手 (00242058)
• キーワード: in situ hybridization / mRNA / 下垂体腺腫 / 電子顕微鏡

研究概要

対象とした下垂体腺腫は、17例の成長ホルモン産生腺腫、10例のプロラクチン産生腺腫、14例の臨床的非機能性腺腫である。in situ hybridization(ISH)法を用いて下垂体前葉ホルモンmRNAの発現について検討を行い、成長ホルモン産生腺腫と臨床的非機能性腺腫の一部で免疫組織化学で陰性であるにもかかわらず、当核ホルモンmRNAの発現が確認された。これらホルモン合成にまで至らないmRNAの細胞内局在について電子顕微鏡下でのISH(EM-ISH)により検討した。方法は、パラフォルムアルデヒドで固定後の凍結切片を用い、ビオチン化オリゴヌクレオチドプローブを用いて、ISHを行った。mRNAのsignal detectionは、horseradish peroxidaseで行い、陽性所見がえられたのち、osmification、倒立法によるEpon包埋をおこない、電子顕微鏡で観察した(Preembedding法)。その結果、これらのmRNAは、ホルモン合成にまで至るmRNAと同様に、粗面小胞体に局在することが確認された。また、これらのホルモン合成にまで至らないmRNAが、実際にホルモンを翻訳しうるmRNAなのか、それともmRNAの発現があってもその後の翻訳の過程に問題があるのか、という点も大変興味深い問題である。この点について、in vitro translation法により、mRNAから蛋白合成をおこなうことにより検討したいと考えており、今後の課題となっている。

研究成果

• [文献書誌] Matsuno A.: "Application of biotinylated oligonucleotide probes to the detection of pituitary hormone mRNA using Northern blot analysis,in situ hybridization at light and electron microscopic levels" Histochem J. 26. 771-777 (1994)
• [文献書誌] Matsuno A.: "Ultrastructural distribiction of growth hormone,prolactin mRNA in nomal rat pituitary cells:A comparison between preembedding and postembedding methods" Histochemistry. 102. 265-270 (1994)
• [文献書誌] Matsuno A.: "Expression of plurihormonal mRNAs in somatotroph adenomas detected using a non-isotopic in situ hybridization method:Comparison with lactotroph adenomas" Hum Pathol. 26. (1995)
• [文献書誌] Matsuno A.: "HGH,PRL and ACTH gene expression in clinically non-functioning adenomas detected with non-isotopic in situ hybridization method" Endocr Pathol. 6. (1995)
• [文献書誌] 松野 彰: "分子生物学による下垂体腺腫の分類:非放射性プローブを用いたin situ hybridization法によるmRNAの発現に関する検討に基づいて" 病理と臨床. 12. 1332-1337 (1994)