転写因子AP1の活性化に関与するプロテインキナーゼCの基質の同定

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06780559
• 研究機関: 横浜市立大学
• 研究代表者: 平井 秀一 横浜市立大学, 医学部, 講師 (80228759)
• キーワード: AP1 / Jun / PKC / Ras / TRE / 転写制御 / シグナル伝達

研究概要

マウス繊維芽細胞、NIH3T3を材料としたこれまでの実験より、PKCδがAP1/Junを効率よく活性化すること、さらに、Rasのdominant negative 変異体を用いた実験によりこれにはRasの活性が必要なことを明らかにしてきた。ただし、TRE-tk-CATの発現を指標としたAP1/Junの活性化に対する活性型Rasの効果は、活性型PKCδのものと比べて10分の1程度と低く、Rasを介したシグナル伝達経路のみならずPKCδに特異的なシグナル伝達経路がAP1/Junの活性化に必要であることが予測された。さらに、キナーゼ活性を失わせたPKCδの変異体が、活性型PKCδにより引き起こされるAP1/Junの活性化に対してdominant negativeに作用することから、PKCδはその下流のシグナル伝達を媒介する蛋白質と、かなり安定した複合体を形成するのではないかと考えた。この蛋白質を同定するため、PKCδをプローブとし、NIH3T3細胞のmRNAをもとに作製したcDNA発現ライブラリーをスクリーニングした結果、複数のcDNAを、PKCδ結合蛋白質をコードするものとして分離することに成功した。現在これらの生理活性について検討中であるが、あるものは、細胞を飢餓状態に置くことにより発現が誘導されることで知られる遺伝子産物と高い相同性を示した。このことは、活性型PKCδが、AP1/Junを活性化するにもかかわらず細胞増殖に対しては抑制作用を示すという以前の知見を説明する上で有力な手がかりとなる可能性がある。今後、AP1/Junの活性化に大きく影響を及ぼすERK、JNKの活性を指標に加え、AP1/Jun活性をコントロールするシグナル伝達経路を解析していきたい。

研究成果

• [文献書誌] S.-i.Hirai et al.: "Ras-dependent signal transduction is indispensable but not sufficient for the activation of AP1/Jun by PKCδ." EMBO J.13. 2331-2340 (1994)
• [文献書誌] S.Ohno et al.: "Activation of novel protein kinase Cδ and Cε upon mitogenic stimulation of quiescent rat 3Y1 fibroblasts." J.Biol.Chem.269. 17495-17501 (1994)
• [文献書誌] A.Fujise et al.: "Specificity of the high affinity interaction of protein kinase C with a physiological substrate,myristoylated alanine-rich protein kinase C substrate." J.Biol.Chem.269. 31642-31648 (1994)
• [文献書誌] M.Hirano et al.: "A protein kinase C isozyme,nPKCε,is involved in the activation of NF-κB by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA) in rat 3Y1 fibroblasts." Biochem.Biophys.Res.Comm.206. 429-436 (1995)
• [文献書誌] K.Mizuno et al.: "UCN-01,an anti-tumor drug,is a selective inhibitor of the conventional PKC subfamily." FEBS Lett.359. 259-261 (1995)