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本研究では、リンパ球に特異的に発現される新規のプロテインチロシンホスファターゼ(PTP)遺伝子をクローニングし、そのリンパ球活性化のシグナル伝達機構における機能を明らかにすることを目標とした。
今年度の研究において、PTPのチロシンホスファターゼにある高相同領域部分の塩基配列をもとに作製されたdegenerateプライマー(一対)を用いたpolymerase chain reaction(PCR)により多数のPCR産物が得られ、それらの塩基配列を調べた。ジーンバンクでの相同性検索の結果、新規PTPと思われる2種類のPCR産物が得られた。それらは、リンパ球特異的ではないが免疫担当細胞において発現が認められた。そこで、得られた2種類のPCR産物をプローブとして、ヒト胸腺及び末梢リンパ球由来のcDNAライブラリーから、完全長のPTP遺伝子のクローニングを行っている。今までのところ成功していないが、各種cDNAライブラリーを用いて、完全長のPTPcDNAクローンのスクリーニングを検討する予定である。また、ゲノムDNAのスクリーニングを開始しており、新規PTP遺伝子の構造解析を進めているが、将来的には、遺伝子ターゲティングも行う予定である。
degenerate primerを用いたサブトラクションPCR法に関して、その最適条件を検討してきたが、リンパ球特異的遺伝子の濃縮はできているが、実用できるほどの効率は得られていない。とくに、サブトラクション時におけるアニーリング温度、時間、緩衝液の組成(塩濃度など)の設定が特に問題となっており、さらなる検討が必要である。
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