当研究では、BMPの作用機序を解明することを目的とし、mRNA Differntial Display法を用いて、BNPを作用させた際に非常に早い段階で誘導され、BMPの作用をコントロールしている可能性のある遺伝子の解析を行なった。 骨芽細胞様細胞株MC3T3-E1および骨髄由来幹細胞株ST2にリコンビナントOP-1(BMP-7)を作用させ、骨芽細胞のマーカーであるアルカリフォスファターゼ活性を調べたところ、OP-1を加えた培養細胞は対照群に比較して明らかに高い活性を示した。 そこで、これらの細胞からAGPC法によってtotal RNAを調整した。Differential Display法に従い得られたcDNAテンプレイトを20種類の組み合わせのプライマーを用いて35SdATPの存在下にてPCRを行なった。これを電気泳動にてシークエンスゲル上に展開した後、オートラジオグラフィを行った。OP-1を作用させたものと対照群についてオートラジオグラフィを解析し結果、MC3T3-E1細胞について66個、ST2細胞について11個の明らかに差違を認めるDNAフラグメントを得ることができた。 DNAシークエンサーを用いてこれらのDNAのシークエンスの解析を行なった結果、ユビキチン、SP-1など既知のシークエンスデータと高いホモロジーを示すものが存在した。これらDifferential Display法で得られたクローンが確かにOP-1を作用させたものに特異的に発現しているか確認するためにNorthernblottingによる解析を行った。これまで解析したクローンの多くは特異的に発現しているとはいいがたく、2つのクローンのみがOP-1の作用特異的に発現しており、現在これらのクローンの解析を進行中である。
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