血管皮内ヘパラン硫酸(Ryudocan)の血管障害における分子病態的機能解析

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06836009
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 小嶋 哲人 名古屋大学, 医学部, 助手 (40161913)
• 研究分担者: 安部 明弘 名古屋大学, 医学部, 医員
• キーワード: 血管内皮 / Ryudocan / ヘパラン硫酸プロテオグリカン / 特異抗体 / 免疫組織染色 / bFGF / ミッドカイン(MK) / Tissue Factor Pathway Inhibitor(TFPI)

研究概要

血管内皮ヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG)はヘパリン様糖鎖をもち、そのアンチトロンビンIIIコファクター活性を介して血液の流動性を保つことに重要な役割を担っていると考えられている。既に我々は、抗凝固活性をもつヘパラン硫酸プロテオグリカン(Ryudocan)のラットおよびヒト分子コア蛋白cDNAのクローニングに成功している。昨年度は、ヒトRyudoxanコア蛋白CDNAのコードするアミノ酸配列をもとにした合成ペプチドを用いてヒト分子に対する特異抗体・抗ヒトRyudocanモノクローナル抗体を作製したが、今年度はこれを用いて血管内皮様細胞(EAhy926細胞)の培養上清からヒト分子を精製分離し、各種ヘパリン結合蛋白分子との相互作用の解析を試みた。その結果、精製ヒトRyudocan分子は、ミドカイン(MK)、bFGF、およびTisssue Factor Pathway Inhibitor(TFPI)の順にそれぞれとヘパラン糖鎖依存性の強い親和性をもつことが判明した。また、組織免疫学的な本分子存在様式の検索にて、胎盤絨毛トロホブラスト、大動脈粥状硬化巣において粥状部間質、血管周囲の末梢神経線維束に強い染色像が認められた。ヘパラン硫酸は動脈内膜肥厚硬化の原因のひとつである血管平滑筋細胞の増殖抑制作用、あるいはbFGFのレセプター補助作用をもつことが報告されており、血管あるいは組織障害部での修復過程に何らかの重要な働きを果たしている推測された。また、Ryudocan分子が神経線維伸長作用をもつMK、あるいは外因系凝固反応阻止因子であるTFPIなどとも相互作用をもつことが判明し、本分子が生体内でも多機能分子として様々な血管機能に関わっていることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] T.Kojima et al.: "Eotablishmant and Chanicteigation of an Immature Humas Migakaryoblastic cell Line,MEG-A2:" Leu Kecmia. 9. 341-349 (1995)
• [文献書誌] T.Kojima et al.: "A Quantitatiue Protein S Deficiency Associated with a Novel Nonscuse Mutation and Murkedly Reduwi Levels of Mutated mRNA" Thromb Haemost.74. 590-595 (1995)
• [文献書誌] T.Kojima et al.: "Ryudocan,Its Molecular Structure and Function" Treuds in Glycosci Glycotecb.7. 385-403 (1995)
• [文献書誌] T.Kojima et al.: "Diagnosis of Henopilia B Carriers Using Two Novcl Dinuelectide Polymo-phisins and Hha I RFLP of the Factor IX Gene in Japanese Subjects" Thromb Haemost. 74. 1009-1014 (1995)
• [文献書誌] 小嶋哲人 他: "ヒト血管内皮ヘパラン硫酸プロチオグリカン-Ryudocanのコア蛋白cDNAクローニングおよび生物学的機能解析" 腎臓. 17. 41-42 (1995)
• [文献書誌] 小嶋哲人 他: "第VIII因子遺伝子逆位解析の重症血友病Aにおける保因者診断出生前診断への応用" 臨床血液. 36. 1252-1256 (1995)
• [文献書誌] T.Kojima et al.: "Factor XII,Prekallikrein,and Higb,mole calan-weight kiuinogen.,in K.A.Higd and H.R.Robevls(ea):Molecolor Basis of Thrombosis and Himostasis" New Yosk,Mervel Dekker, 670 (1995)