1994 年度実績報告書

Crk結合リン酸化蛋白質p130の機能解析

研究課題

研究課題/領域番号	06857014
研究機関	自治医科大学
研究代表者	堺隆一自治医科大学, 医学部, 助手 (40215603)
キーワード	Crk / p130 / SH2 / SH3 / チロシンキナーゼ / Src
研究概要	v-Crkを発現させたラット3Y1細胞(3Y1-Crk)より、v-Crkと結合するラットp130を抗体カラムにより純化し、部分アミノ酸配列決定によりp130のcDNAをクローニングした。cDNAの構造解析から、p130はSrc homology3(SH3)領域と15個のSH2結合部位の集積する領域を持つ新規の信号伝達分子であることがわかった。このp130蛋白質をCas(Crk-associated Substrate)と命名し、3種類の部分領域に対する抗体を用いた免疫学的解析を行った。その結果、p130は正常の3Y1細胞では115kDと125kDの主として2本のリン酸化チロシンを含まないバンドとして検出されるが、v-Crkまたはv-Srcでトランスフォームした3Y1細胞(3Y1-Crk,SR-3Y1)では強くリン酸化をうけた125kD以上のブロードなバンドとして検出されることがわかった。p130はv-Crkおよびv-Srcを発現する細胞の双方でチロシン残基でリン酸化され、リン酸化特異的にこれらの蛋白質と結合していることが示された。ペプチダーゼによるマッピングを用いることにより、v-Srcと結合することで知られる130kDの未知の主要基質と、このp130とが同一分子であることが確認された。また正常細胞では脳、精巣に高発現が認められること、リン酸化に伴いp130は細胞質分画から細胞膜分画へ移行することが観察された。SH2保有分子の共通信号制御分子としてp130蛋白質は全く独自の機能を持つと考えられる。本年度にp130の蛋白質精製をJBCに、遺伝子クローニング・免疫化学的解析をEMBO誌にそれぞれ報告した。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] 小川誠司: "The C-terminal SH3 domain of the mouse c-Crk protein negatively regulates tyrosine-phosphorylation of Crk associated p130 in rat 3Y1 cells." Oncogene. 9. 1669-1678 (1994)
[文献書誌] 堺隆一: "A novel signaling molecule,p130,forms stable complexes in vivo with v-Crk and v-Src in a tyrosine phosphorylation-dependent manner." EMBO.Journal. 13. 3748-3756 (1994)
[文献書誌] 堺隆一: "Characterization,partial purification and peptide sequencing of p130,the main phosphoprotein associated with v-Crk oncoprotein." Journal of Biological Chemistry. 269. 32740-32746 (1994)
[文献書誌] 平野直人: "Molecular cloning and characterization of a cDNA for bovine phospholipase C-α." BBRC. 204. 375-382 (1994)
[文献書誌] Bruce Mayer: "Evidences that SH2 domains in cis or trans promote precessive phosphorylation of specific substrates by protein-tyrosine kinases." Current Biology. (in press). (1995)
[文献書誌] 五味玲: "Frequent loss of the cyclin-dependent kinase 4-inhibitor(CDK4I) gene in human gliomas." Japanese Journal of Cancer Research. (in press). (1995)
[文献書誌] 堺隆一: "CrkとSrcの共通信号媒介因子 p130^<cas>" 細胞工学第13巻第11号(秀潤社), 976-982 (1994)

1994 年度 実績報告書

Crk結合リン酸化蛋白質p130の機能解析

研究代表者

堺 隆一 自治医科大学, 医学部, 助手 (40215603)

研究成果

[文献書誌] 小川 誠司: "The C-terminal SH3 domain of the mouse c-Crk protein negatively regulates tyrosine-phosphorylation of Crk associated p130 in rat 3Y1 cells." Oncogene. 9. 1669-1678 (1994)

[文献書誌] 堺 隆一: "A novel signaling molecule,p130,forms stable complexes in vivo with v-Crk and v-Src in a tyrosine phosphorylation-dependent manner." EMBO.Journal. 13. 3748-3756 (1994)

[文献書誌] 堺 隆一: "Characterization,partial purification and peptide sequencing of p130,the main phosphoprotein associated with v-Crk oncoprotein." Journal of Biological Chemistry. 269. 32740-32746 (1994)

[文献書誌] 平野 直人: "Molecular cloning and characterization of a cDNA for bovine phospholipase C-α." BBRC. 204. 375-382 (1994)

[文献書誌] Bruce Mayer: "Evidences that SH2 domains in cis or trans promote precessive phosphorylation of specific substrates by protein-tyrosine kinases." Current Biology. (in press). (1995)

[文献書誌] 五味 玲: "Frequent loss of the cyclin-dependent kinase 4-inhibitor(CDK4I) gene in human gliomas." Japanese Journal of Cancer Research. (in press). (1995)

[文献書誌] 堺 隆一: "CrkとSrcの共通信号媒介因子 p130^<cas>" 細胞工学 第13巻 第11号(秀潤社), 976-982 (1994)

1994 年度実績報告書

堺隆一自治医科大学, 医学部, 助手 (40215603)

[文献書誌] 小川誠司: "The C-terminal SH3 domain of the mouse c-Crk protein negatively regulates tyrosine-phosphorylation of Crk associated p130 in rat 3Y1 cells." Oncogene. 9. 1669-1678 (1994)

[文献書誌] 堺隆一: "A novel signaling molecule,p130,forms stable complexes in vivo with v-Crk and v-Src in a tyrosine phosphorylation-dependent manner." EMBO.Journal. 13. 3748-3756 (1994)

[文献書誌] 堺隆一: "Characterization,partial purification and peptide sequencing of p130,the main phosphoprotein associated with v-Crk oncoprotein." Journal of Biological Chemistry. 269. 32740-32746 (1994)

[文献書誌] 平野直人: "Molecular cloning and characterization of a cDNA for bovine phospholipase C-α." BBRC. 204. 375-382 (1994)

[文献書誌] 五味玲: "Frequent loss of the cyclin-dependent kinase 4-inhibitor(CDK4I) gene in human gliomas." Japanese Journal of Cancer Research. (in press). (1995)

[文献書誌] 堺隆一: "CrkとSrcの共通信号媒介因子 p130^<cas>" 細胞工学第13巻第11号(秀潤社), 976-982 (1994)