P4501A1遺伝子の転写制御を司るAhレセプターの構造と機能解析・・・遺伝子診断への応用・・・・

1994 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 06857173
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 伊藤 進 大阪大学, 薬学部, 助手 (70223154)
• キーワード: P450 1A1 / チトクローム / Ahレセプター / Gal4 / 転写制御

研究概要

1)ヒトAhレセプター遺伝子を単離するために、ヒトAhレセプターcDNAをプローブとしてCharon4Aヒトゲノムライブラリーをスクリーニングした。スクリーニングの結果、2個の陽性クローンを単離した。得られた2つの陽性クローンの中で、5'上流領域を含むクローンλF2-45のEco RI断片をpUC18ベクターに組み込んだpUCF2-45を作製した。このプラスミドを用いて、5'上流領域を-1599までの塩基配列を決定した。Ahレセプター遺伝子は8個の転写開始点を有しており、その5'上流配列は、TATA boxが欠けていたが、一方複数のGC boxが存在しており、典型的なhouse keeping geneの構造を取っていた。Ahレセプター遺伝子の転写誘導が多環芳香族炭化水素である3-メチルコラントレンで起こるか否かをHep G2細胞で検討したところ、CYP1A1遺伝子の転写誘導は起こったが、Ahレエプター遺伝子の転写誘導は起こらなかった。
2)Ahレセプターの転写活性化領域を調べるために、Gal4のcDNA結合領域とAhレセプターのN末端からの欠損させた遺伝子とを融合したキメラ遺伝子を作製して、CATアッセイを行った。その結果、N末端から221番目のアミノ酸よりC末端部分に転写活性化領域があると考えられた。非常に興味深いことに転写活性化領域として知られているglutaminrich regionを取り除いても、この転写活性は残存していることより、新たな転写活性化領域がC末端129の間にあると予測された。

研究成果

• [文献書誌] Hirorori Nakura et al.: "Activites of Drug Metabolizing Enzymes in Liver of Suncus Murinus (Suncus) : Possible Lack of N-AcetyHransferase Activity in Liver Cytosol" Pharmacology. 48. 201-204 (1994)
• [文献書誌] Tsutomu Sakuma et al.: "Sex-related Differences in the Expression of Cytochrome P450 IN Hamster : cDNA Cloning and Examination for the Expression of Three Distinct Cyp2c cDNAs" Mol.Pharmacol.45. 228-236 (1994)
• [文献書誌] Hisashi Harada et al.: "Structure and Regulation of the Human Interferon Regulatory Factor I (IRF-1) and IRF-2 Genes : Implications for a Gene Network in the Interferon System" Mol.Cell.Biol.14. 1500-1509 (1994)
• [文献書誌] Eiji Kashiyama et al.: "Stereoselective S-Oyidation of Flosequinan Sulfide by Rat Hepatic Flavin-cantaining Monooxygenase 1A1 Expressed in Yeast" Biochem.Pharmacol.47. 1357-1363 (1994)
• [文献書誌] 伊藤 進: "ダイオキシンと結合する転写制御因子" ファルマシア. 30. 633-634 (1994)
• [文献書誌] Yashiki Takahashi: "Characterization of the Human Ah Receptor Promoter in Human Liver Cell Line,HePG2" Pharmacogenetics. 4. 219-222 (1994)
• [文献書誌] Tetsuya Kamataki et al.: "Characters of House Musk Shrew (Sunaus Murinus) : Focusing on Fnzymes Imolved in Drug Metabolism" C.-Y.Chen, 8 (1994)