| 研究概要 |
レトロウイルスは、感染後に宿主によりその発現が転写レベルで抑制されるいわゆるgene silencingという現象がしばしば見られ、HIVやHTLV-1にみられる潜伏感染もこれを反映している。しかし、その分子機構は未だほとんど明らかにされていない。また近年、RNAを介した宿主-寄生体相互作用に関する新たな概念が提唱された。そこで本研究では、U3領域を標的としたsiRNA様分子が、染色体上のU3プロモーター近傍を標的としてウイルスの転写レベルでの発現抑制を誘導している可能性の追求から開始して、ウイルス感染防御におけるRNA干渉系の機能解明を目的とする。本研究では、マウス白血病ウイルス(MLV)のU3領域の発現制御を例に取り、ここにsmall RNAによる転写抑制(RdTS)が働くか否かを検証した。
昨年度において、shRNA発現レンチウイルスベクター導入実験を行い、RdTSが誘導されないことをHeLaS3や、TIG-3,3Y1細胞において観察した。
RdTSが起きるにはshRNAまたはそのプロセシング産物が核内にあることが必要である。そこで本年度において、shRNA発現レンチウイルスベクターから転写されたshRNAがプロセシングされ、細胞質だけではなく核内にも多く存在することをノザンプロッティング法により示し、MLVのプロモーターを標的としたshRNAのプロセシング産物が核内に存在するにもかかわらず転写抑制を誘導しないことを証明した。
また、RdTSが誘導されるという報告のあったRASSFIAプロモーターについても検討した。HeLa細胞においてRASSFIAプロモーターを標的としたshRNAにより転写抑制が誘導されるかどうかの検証を行ったが、抑制効果は見られなかった。
以上の実験結果から、哺乳類細胞においては、RdTSはこれまでの報告のようなゲノムワイドに起きる現象ではないと結論づけた。
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