ジーンターゲッティングを利用したアミロイドーシス発症機構の解析

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07044242
• 研究機関: 山梨医科大学
• 研究代表者: 前田 秀一郎 山梨医科大学, 医学部, 教授 (10117244)
• 研究分担者: EPISKOPOU V. MRC臨床科学センター, 王立医科大学院大学・マウス発生学研究室, 研究室主任 ; SARAIVA M.J. ポルト大学, 医科学研究所, 教授 ; COSTANTINI F コロンビア大学, 医学部, 教授 ; GOTTESMAN M. コロンビア大学, 癌研究所, 所長 ; 島田 和典 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (40037354)
• キーワード: アミロイドーシス / トランスサイレチン(プレアルブミン) / 疾患モデルマウス / 家族性アミロイドポリニューロパチー / ジーンターゲティング / 胚幹細胞 / 血清アミロイドP成分 / トランスジェニックマウス

研究概要

1.相同組換えで血清アミロイドp成分(sap)遺伝子に挿入変異が導入された6コのマウス胚幹(ES)細胞の中から4コを選んでC57BL/6マウスの胚盤胞に注入し、キメラマウスを得た。これらキメラマウスの雄とC57BL/6マウスの雌とを交配させ、2匹の雄キメラマウスが生殖細胞のsap遺伝子に挿入変異を持つことを確認した。現在、一対のsap遺伝子の一方に変異を持つマウス株同志の交配により、変異sap遺伝子のみをもつ無SAPマウス株の確立を目指している。
2、無トランスサイレチン(TTR)マウスではTTRやアルブミンと結合した甲状腺ホルモンの血中量は減少しているが、蛋白質と結合しない微量で生理活性の高い遊離型の甲状腺ホルモンの血中量は対照野生型マウスと差異がないことを見出した。また、無TTRマウスの血中レチノール量は減少しているが、種々の臓器中に貯蔵されているレチノール量は減少せず、微量で生理活性の高い全トランス-レチノイン酸の血中量は対照野生型マウスの約2.3倍に増加していた。
3、ヒト異型TTRのみを産生する変異マウスでは、月齢11ヵ月頃から消化管を中心にアミロイドが沈着し始め、月齢を増すにつれ、沈着臓器の拡大傾向が見出された。これらマウスと内在性の正常TTRとヒト異型TTRの双方を産生する同月齢の対照マウスとについて、月齢20カ月迄アミロイドの沈着時期、程度や沈着臓器を比較解析したところ、差異を認めなかった。この結果は、内在性マウス正常TTRはヒト異型TTRの沈着に何ら影響しないことを示唆する。

研究成果

• [文献書誌] Horie,K.,Maeda,S.,Nishiguchi,S.,Gottesman,M.and Shimada,K.: "A replacement vector used to introduce subtle mutations into mouse genes." Gene. 166. 197-204 (1995)
• [文献書誌] Kato,G.,Maeda,S.: "Novel phosphorylation at amitotic site,serine 75,in human pp60^<C-SRC> from unsynchronized human tumor cells having aspherical morphology." Biochem.Biophys. Res. Commun.216. 619-629 (1995)
• [文献書誌] 前田秀一郎・横井恭子: "家族性アミロイドポリニューロパチーに近似した疾患モデルマウスの作出" 蛋白質核酸素酵素. 40. 2204-2213 (1995)
• [文献書誌] 前田秀一郎: "常染色体優性の遺伝病、家族性アミロイドポリニューロパチーの遺伝子診断" 医学のあゆみ. 174. 484-489 (1995)
• [文献書誌] 前田秀一郎: "遺伝子治療研究のための疾患モデル動物" 最新医学. 50(増刊号). 1740-1749 (1995)
• [文献書誌] Wei,S.,Episkopou,V.,Piantedosi,R.,Maeda,S.,Shimada,K.,Gottesman,M.E.and Blaner,W.S.: "Studies on the metabolism of retinol and retinolbinding protein in transthyretin-deficient mice produced by homologous recombination." J. Biol. Chem.270. 866-870 (1995)