遺伝子治療のためのEBウイルスベクターに関する研究

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07044272
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 高田 賢蔵 北海道大学, 医学部, 教授 (30133721)
• 研究分担者: 杉浦 亮 北海道大学, 医学部, 助手 (20241317) ; 今井 章介 北海道大学, 医学部, 講師 (60232592) ; サグデン ビル ウィスコンシン大学, マカードル研究所, 副所長教授
• キーワード: EBウイルス / 遺伝子治療 / ウイルスベクター

研究概要

EBVには従来のウイルス増殖のための細胞が無かった。われわれはEBV増殖に許容性の細胞(Akata-)を新たに分離し、本細胞を用いて組み換えEBVを大量に増殖できるシステムを確立した。しかし、EBVにはある種のヒト癌との関連が示唆されており、遺伝子治療のベクターとしてEBVを使用するためには、安全面の改良が必須である。今年度は以下の研究を行った。
1.発癌活性の無いEBV産生システムの開発
EBVの発癌遺伝子LMP1を欠失したEBV作製を試みているが、現在まで成功していない。相同組み換え用のプラスミドにさらに改良を加えて、組み換えEBV作製を試みている。
2.増殖性を無くしたEBV産生システムの開発
EBVの増殖に必須なBALF2遺伝子を欠失したEBV作製を試みているが、現在まで成功していない。相同組み換え用のプラスミドにさらに改良を加えて、組み換えEBV作製を試みている。BALF2遺伝子発現パッケージング細胞はすでに作製した。
3.アンプリコン系の開発
200kbを越えるEBV DNAはウイルス粒子にパッケージングされないことを利用し、巨大ゲノムEBV感染細胞を作製し、この細胞をパッケージング細胞として、EBVの複製起点とパッケージングシグナルをもつプラスミドをウイルス粒子として産生するシステム開発を行っている。
4.平成9年2月に共同研究者であるサグデン博士を研究代表者の研究室へ招へいして、相互の研究結果についての検討を行った。また、平成9年1月と3月に日本側研究者3名がサグデン博士の研究室を訪問し、米国側研究者と相互の研究結果についての検討を行った。

研究成果

• [文献書誌] Shimizu,N.: "Clonal prepagation of Epstein-Barr virus (EBV) recombinants in EBV-negative Akata cells" J.Virol.70. 7260-7263 (1996)
• [文献書誌] Wen,S.: "Association of Epstein-Barr virus (EBV) with Sjogren's sydrome : differential EBV expression between epithelial cells and lymphocytes in salivary glands" Am.J.Pathol.149. 1511-1517 (1996)
• [文献書誌] Yoshiyama,H.: "Epstein-Barr virus infection to human gastric carcinoma cells : implication of the existence of a new virus receptor different from CD 21" J.Virol.(印刷中).
• [文献書誌] Koide,J.: "Spontaneous establishment of an Epstein-Barr virus infected fibroblast line from the synovial tissue of a rheumatoid arthritis patient" J.Virol.71. 2478-2481 (1997)
• [文献書誌] Wen,S.: "Epstein-Barr virus (EBV) infection in salivary gland tumors : lytic EBV infection in nonmalignant epithelial cells surrounded by EBV-positive-lymphoma cells" Gastrointest.Endosco.227. 484-487 (1997)
• [文献書誌] Yanai,H.: "Clinical morphology of Epstein-Barr virus-associated gastric carcinoma" Virology. (印刷中).
• [文献書誌] Takada,K.: "Epstein-Barr virus and human cancer,Gann Monograph on Cancer Res.Vol.45" Japanese Cancer Association (in press),