転写因子群による赤血球特異的な遺伝子発現制御機序の解析

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07258201
• 研究機関: 筑波大学
• 研究代表者: 山本 雅之 筑波大学, 基礎医学系, 教授 (50166823)
• 研究分担者: 五十嵐 和彦 筑波大学, 基礎医学系, 講師 (00250738)
• キーワード: 遺伝子発現制御 / 転写因子 / 赤血球 / GATA因子群 / NF-E2 / Maf

研究概要

これまでに,GATA配列およびNF-E2結合配列に結合する転写因子群が遺伝子発現の赤血球特異性に重要な貢献を果していることが強く示唆されている.本研究ではこれらの転写因子の発現と機能を以下の三つの観点から検討した.
GATA因子群やNF-E2を発現するプラスミドを赤血球系形質を持った培養細胞株に遺伝子導入し,これらの因子を誘導的に過剰発現した際の細胞の表現形質や分化能の変化を検討した.NF-E2の小サブユニットであるMafKをマウス赤白血病(MEL)細胞に過剰発現したところ,同細胞は他の誘導剤の存在の有無に関わらず赤血球に分化した.このことから,MafKは実際に血液細胞の分化に働く転写因子であることが理解される.また,GATA因子群のうちGATA-1とGATA-2をコードする遺伝子の転写制御解析を進めた.GATA-1の精巣型プロモーターには二つのGATA配列が存在し,それらは実際に転写活性化シグナルを媒介することができる配列であった.一方、赤血球型プロモーターの機能をトランスジェニックマウス系を用いて検討したところ,同プロモーターと上流域2.9kbはin vivoで胎児型赤血球特異的な転写活性化を指示することが可能であることが明らかになった.さらに,MafK遺伝子の構造と機能を行い,MafK遺伝子には中胚葉特異的なプロモーター/第一エキソンと神経細胞特異的なそれとが存在することを見出した.マウスGATA-1抗体N6はPFA固定した組織切片中のGATA-1を免疫染色できることから,MEL細胞より核を単離し,PFA固定後N6抗体で免疫沈降する方法でGATA-1の標的遺伝子の単離・同定が可能である.そこで,本方法を用いてGATA-1遺伝子の調節領域にGATA-1自身が結合していることを証明した.

研究成果

• [文献書誌] Ishihara, H., et al: "Structure and regulation of the GATA-3 gene." J.Biochem.117. 499-508 (1995)
• [文献書誌] Igarashi, K., et al.: "Structure, expression and function of small Maf protein MafK in mouse." J. Biol. Chem.270. 7615-7624 (1995)
• [文献書誌] Kataoka, K., et al.: "Smal Maf protein heterodimerizes with Fos and potentially acts as competitive repressors of NF-E2 transcription factor." Mol. Cell. Biol.15. 2180-2190 (1995)
• [文献書誌] Igarashi, K., et al.: "Conditional expression of ubiquitous transcription factor MafK induces erythroleukemia cell differentiation." Proc. Natl. Aced. Sci. USA. 92. 7445-7449 (1995)
• [文献書誌] Meguro, K., et al.: "The role of the erythroid-specific 5-aminolevulinate synthase gene expression in erythroid heme biosynthesis." Blood. 86. 940-948 (1995)
• [文献書誌] Ito, E., et al.: "Expression of erythroid-specific genes in acute megakaryoblastic leukemia and transient myeloproliferative disorder in Down syndrome." Brit. J. Haematol.90. 607-614 (1995)
• [文献書誌] Itoh, K., et al.: "Cloning and characterization of a novel erythroid-derived CNC family transcription factor heterodimerizing with the small Mafs." Mol. Cell. Biol. 15. 4184-4193 (1995)
• [文献書誌] Sato, A., et al.: "Aberant progenitors common to megakaryocytic and myeloid cells in a Down's infant with transient abnormal myelopoiesis." Leukemia Res.19. 811-815 (1995)
• [文献書誌] Jippo, T., et al.: "Abundant expression of GATA-2 in proliferating but not in differentiated mast cells in tissues of mice." Blood. (in press).
• [文献書誌] Motohashi, et al.: "Mesodermal-versus neuronal-specific expression of MafK is elicited bydifferent promoters." Genes Cells. (in press).
• [文献書誌] Komatsu, N., et al: "Establishment and characterization of the thrombopoietin-dependent magakaryocytic cell line, UT-7/TPO." Blood. (in press).
• [文献書誌] Igarashi, K., et al.: "Biology of Hematopoiesis and Stem Cell Gene Transfer" INTERCEPT (Andover), 427 (1995)