チロシンリン酸化酵素関連分子の遺伝子ターゲティング法によるがん化分子機構の解析

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07273271
• 研究機関: 岡崎国立共同研究機構
• 研究代表者: 八木 健 岡崎国立共同研究機構, 生理学研究所, 助手 (10241241)
• キーワード: Fyn / p53 / ジーンターゲティング / 胸腺腫 / 発がん / Src / T細胞 / チロシンリン酸化酵素

研究概要

1.p53とFynの二重遺伝子欠損マウスの作製とその解析:
遺伝子ターゲティング法により得たp53とFyn欠損マウスの交配により、p53とFynを二重に欠損させたマウス作製を行った。その結果、p53欠損マウスでは全個体(20例)が生後7ヶ月齢までに全てがん発症により死亡したのに対し、p53とFynを二重に欠損させたマウスではがんの発症が6ヶ月齢をすぎても認められず、p53欠損によるがん発症特に胸腺腫発症にFynが重要な役割を果たしていることが明らかとなった。p53欠損による胸腺腫においてFynが過剰発現してがん化を引き起こすことが考えられたが、Fynの発現はむしろ胸腺腫細胞では減少していた。また、Fyn欠損個体では約1/10が突然死するが、興味深いことにp53とFynを二重に欠損させたマウスではこの傾向が高まり、7ヶ月齢までに約半数の個体が突然死した。
2.抗Fynモノクローナル抗体の作製:
我々は本年度、新たにFynに対するモノクローナル抗体を作製することに成功し、その抗体を用いてプロB細胞中での細胞増殖、分化過程におけるFynの局在を西川等との共同研究により明らかにした。その結果、Fynが細胞増殖の際に収縮環や紡錘体上に存在していることを明らかにした。また、Fyn欠損プロB細胞ではIL-7増殖下において細胞分裂が収縮環がくびれる際に止まることが明らかとなり、実際に細胞増殖過程でFynが機能していることが確かめられた。
3.Fyn結合分子の解析:
Fynが実際にがん発症や細胞増殖の際にどの様な細胞内情報伝達系と関連し機能するかを明らかにする目的で、Fynと結合する分子の単離を行っている。FynのSrcファミリー間で保存されていない領域、SH2、SH3と結合する分子を酵母2ハイブリッド系を用いて単離した。その結果、現在までにSrcファミリーと結合することが報告されているhnRNPが得られた他、4種類の新規分子の単離に成功した。現在解析を進めている。
本研究により、チロシンリン酸化酵素のFynが実際のp53欠損によるがん発症に関連することを明らかにすることができた。今後の解析により、がん発症の初期過程での分子機構の解明が期待される。

研究成果

• [文献書誌] Kutsuwada,T.: "Impairment of suckling response,trigeminal neuronal pattern formation and hippocampal LTD in NMDA receptor ε2 subunit mutant mice." Neuron. (in press). (1996)
• [文献書誌] :Yasunaga,M.: "Involvement of Fyn tyrosine kinase in progression of cytokinesis of B lymphocyte progenitor." Journal of Cell Biology. (in press). (1996)
• [文献書誌] Miyakawa,T.: "Radial maze performance,open-field and elevated plus-maze behaviors in Fyn-kinase deficient mice:Further evidence for increased fearfulness." Molecular Brain Research. (in press). (1996)
• [文献書誌] Tezuka,T.: "Physical and functional association of the cbl proto-oncogene product with a Src-family protein tyrosine kinase,p53/56lyn,in the B cell antigen receptor-mediated signaling." Journal of Experimental Medecine. (in press). (1996)
• [文献書誌] Yoshida,M.: "A new strategy of gene trapping in ES cells using 3′RACE." Transgenic Research. 4. 277-287 (1995)
• [文献書誌] Watanabe,S.: "Stable production of mutant mice from double gene converted ES cells with puromycin and neomycin." Biochemical and Biophysical Research Communications. 213. 130-137 (1995)
• [文献書誌] 八木 健: "遺伝学を用いた学習・記憶の分子メカニズムの解析" 蛋白質・核酸・酵素. 40. 2175-2180
• [文献書誌] 八木 健: "特集遺伝子ターゲティング 特集によせて" 組織培養. 21. 1-3
• [文献書誌] 八木 健: "ジーンターゲティングによる行動異常の解析" 日本実験モデル. 11. 31-39
• [文献書誌] 八木 健: "遺伝子ターゲティングによる脳機能解析" 蛋白質・核酸・酵素. 40. 599-608
• [文献書誌] 八木 健: "遺伝子欠損マウスにおける行動解析" 実験医学. 12. 2456-2460
• [文献書誌] Abe,S.: "Molecular cloning of a novel serine/threonine kinase,MRK,possibly involved in cardiac development." Oncogene. 11. 2187-2195 (1995)
• [文献書誌] Ikeda,K.: "Reduced spontaneous activity of mice defective in the ε4 subunit of the NMDA receptor channel." Molecular Brain Research. 33. 61-71 (1995)
• [文献書誌] Kashiwabuchi,N.: "Impairment of motor coordination,Purkinje cell synapse formation,and cerebellar long-term depression in GluRδ2 mutant mice." Cell. 81. 245-252 (1995)
• [文献書誌] Sakimura,K.: "Reduced hippocampal LTP and spatial learning in mice lacking NMDA receptor ε1 subunit." Nature. 373. 151-155 (1995)
• [文献書誌] Miyakawa,T.: "Enhanced susceptibility of audiogenic seizures in Fyn-kinase deficient mice." Molecular Brain Research. 20. 349-352 (1995)
• [文献書誌] Yagi,T.: "Gene targeting of fyn tyrosine kinase in murine nervous system.Genes for development,Cell growth and infectious diseases" Genes for development,Cell growth and infectious diseases,John Libbey Eurotext in Paris. 20. 17-27 (1995)