DNaseIによる早期癌診断法および治療法の開発

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07274228
• 研究機関: 群馬大学
• 研究代表者: 岸 紘一郎 群馬大学, 医学部, 教授 (30169841)
• 研究分担者: 細見 修 群馬大学, 医学部, 助手 (30134274) ; 中島 たみ子 群馬大学, 医学部, 助手 (40008561) ; 矢澤 伸 群馬大学, 医学部, 講師 (10008386) ; 松木 孝澄 群馬大学, 医学部, 助教授 (10126617)
• キーワード: アポトーシス / ヒトDNaseI / ラットDNaseI / 遺伝子マッピング / 遺伝的多型 / 癌診断 / 癌治療

研究概要

ヒトDNaseI遺伝子は全長約3.2kbに及び9個のエクソンから構成されていた。この5′-上流領域にはTATAおよびCATTbox類似配列のみならず、いくつかの転写因子に対応するエレメントが見出されるなど、遺伝子発現に関して、DNaseIに臓器特異性があることが示唆された。我々は、ヒトDNaseIに4個の対立遺伝子によって決定されている遺伝的多型が存在していることを発見した。各対立遺伝子における全exonの塩基配列を決定・比較したところ、3個の多型部位が同定できた。その結果、DNaseIにおける遺伝的多型は、各部位における、1子の塩基置換による1個のアミノ酸置換に起因することが判明した。今回得られた知見を基礎にして、mismatchPCR法とamplification refractory mutation systemを利用したPCR法とを組合せて、DNA試料からのDNaseI遺伝子型判定法を開発した。ヒト×ゲッ歯類体細胞雑種パネルについて、PCR法を使用して解析した結果、ヒトDNaseI遺伝子が第16染色体短腕上の13.3領域に位していることを決定した。
ラット尿よりDNaseIを単離・精製し、その性状を精査した。ラットDNaseIのタンパク質化学的および酵素学的性状は、ヒトDNaseIのそれらと極めて類似していたが、免疫学的に両者は明瞭に区別された。小動物からDNaseIを精製する場合、尿は採集が非侵襲的なうえ、高いDNaseI活性を保有していることから、尿が最適な出発物質であることが判明した。ヒト汗にDNaseI活性を検出し、ヒト汗からの容易なDNaseI型判定法を開発した。汗中の遺伝マーカーは極めて少数なので、DNaseI型が、汗から実施可能な個人識別や遺伝調査に極めて有用な遺伝マーカーになるものと期待される。

研究成果

• [文献書誌] Yasuda, T.: "Structure of the human deoxyribonuclease I (DNase I) gene" Annals of Human Genetics. 59. 1-15 (1995)
• [文献書誌] Yasuda, T.: "The molecular basis for polymorphism of human deoxyribonuclease I" FEBS Letters. 359. 211-214 (1995)
• [文献書誌] Yasuda, T.: "Molecular analysis of the third allele of human deoxyribonuclease I polymorphism" Annals of Human Genetics. 59. 139-147 (1995)
• [文献書誌] Sawazaki, K.: "Correlation of alpha-1-antitrypsin (PI) Polymorphism between blood and serum" Japanese Jornal of Legal Medicine. 49. 65-69 (1995)
• [文献書誌] Nadano, D.: "Activity staining of mammalian ribonuclease inhibitors after electrophoresis in sealed vertical slab polyacrylamide gels" Analytical Biochemistry. 227. 210-215 (1995)
• [文献書誌] Yasuda, T.: "Chromosomal assignment of the human deoxyribonulease I gene, DNASE1 (DNL1)" Cytogenetics and Cell Genetics. 70. 221-223 (1995)
• [文献書誌] Nadano, D,: "Ribonuclease inhibitors in human blood" International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 27. 971-979 (1995)
• [文献書誌] Yasuda, T.: "Genotryping of human deoxyribonuclease I polymorphism by the polymerase chain reaction" Electrophoresis. 16. 1889-1893 (1995)
• [文献書誌] Takeshita, H.: "Deoxyribonuclease 1 from rat urine" Journal of Biochemistry. 118. 932-93 (1995)
• [文献書誌] Nadano, D.: "pH gradient electrophoresis of basic ribonucleases in sealed slab polyacrylamide" Electrophoresis. (in press). (1996)
• [文献書誌] Nadano, D.: "Purification of mammalian ribonuciease using immobilized human ribonuclease" Protein Expression and Purification. (in press). (1996)
• [文献書誌] Yasuda, T.: "A new individualization marker of sweat" Journal of Forensic Sciences. (in press). (1996)
• [文献書誌] Yasuda, T.: "Alpha-2-HS-glycoprotein (AHSG) polymorphism in semen and saliva" Electrophoresis. (in press). (1996)