CTL認識腫瘍拒絶抗原ペプチドの同定と抗腫瘍効果の検討

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07274243
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 中山 睿一 岡山大学, 医学部, 教授 (60180428)
• 研究分担者: 上中 明子 岡山大学, 医学部, 助手 (50273967) ; 小野 俊朗 岡山大学, 医学部, 助手 (50185641)
• キーワード: 細胞傷害性T細胞 / マウス白血病 / 拒絶抗原 / ペプチド

研究概要

1.pRL1ペプチドの発現機構:
CTL認識RL♂1拒絶抗原ペプチドpRL1は、原がん遺伝子c-aktの5′側非翻訳領域に由来することが明らかになった。そこでpRL1ペプチド発現の機構を遺伝子レベルで解析した。この結果、マウス白血病ウイルス(MuLV) long terminal repeat (LTR)の配列が、akt transcriptに融合していることが明らかになった。さらに、LTRの下流に、由来不明の6塩基の挿入があり、この中にATG開始コドンが形成され、c-aktの読み枠の150番目の塩基に融合していた。さらに、ゲノム遺伝子の解析から、RL♂1白血病細胞では、LTR配列がc-akt遺伝子の第1エクソン内に挿入されていることが明らかになった。
2.RL♂1白血病におけるakt発現の解析:
ノザンブロット法による解析では、RL♂1細胞でakt mRNAの発現亢進が認められた。さらに、ウエスタンブロットによる解析で、ウサギ抗AKTペプチド抗体はRL♂1細胞可溶化物の59KDaと56KDa分子の両方と反応し、BALB/c胸腺細胞由来可溶化物の56KDa分子と反応した。デンシトメトリーによる解析で59KDa分子の量は56KDa分子の量の約10倍であることがわかった。
3.pRL1bにおけるアミノ末端側Serの変化:
pRL1aペプチドの前駆体ペプチドと考えられるpRL1bのアミノ酸配列はSIIPGLPLSLである。AKRマウス由来AKT8リンパ腫から回収されたv-AKTの配列はpRL1bのSer相当部位がIIeである。BALB/c胸腺細胞とRL♂1cDNAの塩基配列を比較した結果、SerとIIeの違いは、BALB/cとAKRのマウス系統間の違いに基ずくものであり、突然変異によるものではないことが明らかになった。

研究成果

• [文献書誌] Okumura,C.,et al.: "Induction of murine γδ T cells cytotoxic for xenogeneic rat cells." J.Immunol.154. 1114-1123 (1995)
• [文献書誌] Wada,H.,et al.: "Requirement of CD4^+ T-cells and antigen presenting cells for primary in vitro generation of CD8^+ cytotoxic T-cells against L^d-binding self peptide p2Ca." Immunology.84. 633-637 (1995)
• [文献書誌] Harutsumi,M.,et al.: "Rejection of parental Meth A tumor on concomitant inoculation of Meth-A cells infected retrovirally with the interferon-γ gene into (BALB/c x C57BL/6) F_1 mice." Int.J.Oncol.7. 233-238 (1995)
• [文献書誌] Baba,H.,et al.: "Two isotypes of murine nm23/nucleoside diphosphate kinase,nm23-M11 and nm23-M2 are involved in metastatic suppression of a murine melanoma line." Cancer Research. 55. 1977-1981 (1995)
• [文献書誌] Wada,H.,et al.: "Rejection antigen peptides on BALB/c RL♂1 leukemia recognized by cytotoxic T lymphocytes : derivation from the normally untranslated 5′-region of the c-akt proto-oncogene activated by LTR." Cancer Research. 55. 4780-4783 (1995)