新しいグルタチオン抱合体およびP糖蛋白型排出ポンプの構造と機能

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07276228
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 和田 守正 九州大学, 医学部, 助手 (20220965)
• 研究分担者: 河野 公俊 九州大学, 医学部, 助教授 (00153479) ; 佐々木 裕之 九州大学, 遺伝情報実験施設, 助教授 (30183825) ; 白崎 哲哉 佐賀医科大学, 医学部, 助手 (30264047)
• キーワード: チャンネル / トランスポーター / MRP / ABCファミリー / YBC / MDR / 薬剤耐性 / ディファレンシャル・ディスプレイ

研究概要

本研究の目的はATP駆動型トランスポータとチャンネルの構造、機能協関を明らかにするために、トランスポータの機能異常及び、突然変異の宝庫である様々な薬剤耐性株から新しいトランスポータ遺伝子を単離し、解析することにある。この目的に沿って今年度は以下の成果をあげた。
【1】新しいグルタチオン抱合体排出ポンプ遺伝子の単離:以下の2方法によりシスプラチン耐性関連遺伝子の単離を試みた。
(1)ATP結合カセット(ABC)ファミリー遺伝子の単離:ABCファミリー間のコンセンサス領域からデザインしたプライマーを用いて、33クローンのPCR産物を得た。うち5クローンはMRP遺伝子、1クローンはMRPと類似の新規遺伝子であった。
(2)シスプラチン耐性株4株をソースとして、Differential display法により、シスプラチン耐性株で発現量が亢進するクローンを検索した結果、8クローンの候補遺伝子が単離された(図1)。うち1クローンはMDRと低い相同性を示した。また2クローンはアクチン結合蛋白質のプラスチンと同定された。チャネルとトランスポーターの機能協関におよぼす細胞骨格系の役割という視点から興味深い。
【2】新しいP糖蛋白型排出ポンプ遺伝子の単離:ヒトP糖蛋白関連遺伝子をさらに単離するために、我々によって完成された7q21.1領域の酵母人工染色体(YAC)コンティグからエキソントラップ法によるエキソンの収集を始めた。現在、約50クローンのエキソン候補が単離されている。

研究成果

• [文献書誌] H. Kusaba: "Functional sxpression of yeast artificial chromosome(YAC)-human multidrug resistance genes in mouse cells." Genome Research. 5. 245-258 (1995)
• [文献書誌] K. Torigoe: "YAC-based 1.5Mb contigspanning the buman multidrug resistantce gene region and delineating the amplification unit in two human multidrug resistant cell lines." Genome Research. 5. 233-244 (1995)
• [文献書誌] A. Yokomizo: "Cellular levels of thioredoxin associated with drug sensitivity to cisplatin, mitomycinC, doxorubicin and etoposide." Cancer Res.55. 4293-4296 (1995)
• [文献書誌] T. Kubo: "DNA topoisomerase IIa gene expression unde transcriptional control in etoposide/teniposide resistant human cancer cells." Cancer Res.55. 3860-3864 (1995)
• [文献書誌] A. Yokomizo: "Markedly decreased expression of glutathione S-transferase-p gene in human cancer cell lines resistant to buthionine sulfoximine, an inhibitor of cellular glutathione synthesis." J. Biol. Chem.270. 19451-19457 (1995)
• [文献書誌] S. Sato: "Differential effects of protein kinase inhibitor, H-7, on activation of human multidrug resistance 1(MDR1)promoter." Cell. Pharmacol.2. 153-157 (1995)