1995 年度実績報告書

HIV遺伝子発現調節蛋白質の分子細胞生物学的研究と阻害剤の探究

研究課題

研究課題/領域番号	07277216
研究機関	九州大学
研究代表者	藤木幸夫九州大学, 理学部, 教授 (70261237)
研究分担者	原野友之九州大学, 理学部, 助手 (80037275)
キーワード	HIV / 遺伝子発現調節蛋白質 / Tat / Rev / gpt遺伝子 / 6-チオグアニン耐性 / 核(小体)蛋白質 / 核内輸送
研究概要	HIV遺伝子発現調節蛋白質であるTatおよびRevの細胞内選別輸送とその制御機構を、それぞれに関与する細胞質因子の同定・遺伝子クローニングなどにより分子レベルで解明し、TatやRevと明らかにされた細胞性因子との相互作用制御を含めたTatおよびRevに対する抑制活性を有する物質のスクリーニング系構築を目的として、はじめに以下の2つのアッセイ系の確立を目指している。 1)gpt(hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase)遺伝子の上流にHIV-LTRを繋ぎneo耐性遺伝子を含む発現カッセトを作製し、gpt欠損ヒトCME由来細胞変異株A3.01にトランスフェクションしstableなtransformantの分離をG418存在下で試みた。現在、G418耐性細胞がいくつか分離されており、それらのクローン化と同時にtatのtransientな発現によりgpt mRNAの発現も検定している。これと並行してクローン化された細胞については、SRαプロ-モーターの下流にtat遺伝子を挿入、かつプラストシジン耐性遺伝子をもつプラスミド(構築中)を導入し、ブラストシジン耐性クローンを分離後、6-チオグアニン存在下での細胞の増殖が、Tat非依存性(tat阻害活性)を指標にした表現型で検定できる実験系の構築を検討中である。 2)transient systemの確立:COS細胞などにLTRの下流にルシフェラーゼを繋いだプラスミドとtat遺伝子発現ベクターをコトランスフェクションしtat依存性ルシフェラーゼ発現系の確立に取り組んでいる。この系を用いたtat阻害剤(アンタゴニスト)のスクリーニング系としての有用性を検討する。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Fujiki, Y.: "Approaches to Studies on Peroxisome Biogenesis and Human Peroxisomedeficient Disorders." Ann. N. Y. Acad. Sci.(in press). (1996)
[文献書誌] Shimozawa, N.: "Correction by Gene Expression of Biochemical Abnormalities in Fibroblasts from Zellweger Syndrome. Pediatr." Pediatr. Res.(in press). (1996)
[文献書誌] Tsukamoto, T.: "Peroxisome Assembly Factor-2: A Putative ATPase Cloned by Functional Complementation on a Peroxisome-deficient Mammalian Cell Mutant." Nature Genet.11. 395-401 (1995)
[文献書誌] Nakai, T.: "Multiple Genes, Including a Member of the AAA Family, are Essential for Degradatior of Unassembled Subunit 2 of Cytochrome c Oxidase in Yeast Mitochondoria." Mol. Cell. Biol.15. 4441-4452 (1995)
[文献書誌] 藤木幸夫: "ペルオキシソーム病の遺伝子診断「遺伝子診断-その現状と展望」" 医学のあゆみ. 174. 477-483 (1995)
[文献書誌] 藤木幸夫: "総説:ペルオキシソームの形成機構とペルオキシソーム病" 生化学. 67. 204-223 (1995)
[文献書誌] Fujiki, Y.: "Peroxisome Biogenesis:Topogenic Signal, Peroxisome Assembly Factor, and Zellwager Syndrome. In Membrane Protein Transport(S. Rothman, ed)" Advances in Molecular and Cell Biology(in press), (1995)

1995 年度 実績報告書

HIV遺伝子発現調節蛋白質の分子細胞生物学的研究と阻害剤の探究

研究代表者

藤木 幸夫 九州大学, 理学部, 教授 (70261237)

研究成果

[文献書誌] Fujiki, Y.: "Approaches to Studies on Peroxisome Biogenesis and Human Peroxisomedeficient Disorders." Ann. N. Y. Acad. Sci.(in press). (1996)

[文献書誌] Shimozawa, N.: "Correction by Gene Expression of Biochemical Abnormalities in Fibroblasts from Zellweger Syndrome. Pediatr." Pediatr. Res.(in press). (1996)

[文献書誌] Tsukamoto, T.: "Peroxisome Assembly Factor-2: A Putative ATPase Cloned by Functional Complementation on a Peroxisome-deficient Mammalian Cell Mutant." Nature Genet.11. 395-401 (1995)

[文献書誌] Nakai, T.: "Multiple Genes, Including a Member of the AAA Family, are Essential for Degradatior of Unassembled Subunit 2 of Cytochrome c Oxidase in Yeast Mitochondoria." Mol. Cell. Biol.15. 4441-4452 (1995)

[文献書誌] 藤木幸夫: "ペルオキシソーム病の遺伝子診断「遺伝子診断-その現状と展望」" 医学のあゆみ. 174. 477-483 (1995)

[文献書誌] 藤木幸夫: "総説:ペルオキシソームの形成機構とペルオキシソーム病" 生化学. 67. 204-223 (1995)

[文献書誌] Fujiki, Y.: "Peroxisome Biogenesis:Topogenic Signal, Peroxisome Assembly Factor, and Zellwager Syndrome. In Membrane Protein Transport(S. Rothman, ed)" Advances in Molecular and Cell Biology(in press), (1995)

1995 年度実績報告書

藤木幸夫九州大学, 理学部, 教授 (70261237)