T細胞におけるHIVの遺伝子発現制御因子の研究

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07277225
• 研究機関: 理化学研究所
• 研究代表者: 石井 俊輔 理化学研究所, 分子遺伝子学研究室, 主任研究員 (00124785)
• キーワード: エイズ / 転写因子 / シグナル伝達

研究概要

本研究ではHIVプロウイルスの転写制御に関与する転写因子HIV-EP,NF-kBの阻害剤の開発、転写因子MybのDNA結合ドメインの詳細な構造解析及び全長Mybの結晶構造解析のための試料調製を行った。
昨年度はHIV-EPの阻害剤として有効な金属キレート剤を開発したが、本年度はより広範な合成金属キレート剤の効果を調べ、HIV-EPおよびNF-kBの各々の活性を選択的に効率良く阻害するものを得た。今後これらの阻害剤を用いて2種類のHIVエンハンサー結合蛋白質の機能解明が進むことが期待される。
昨年度はMybのDNA結合ドメインとDNAの複合体の立体構造をNMRにより決定したが、本年度はより詳細に構造の揺らぎについて解析した。その結果、局所的な構造の揺らぎの存在が見い出され、特異的なシステイン残基を介した酸化・還元による制御の可能性が強く示唆された。したがって今後、DNA結合ドメイン内の特異的システイン残基の酸化・還元反応を標的として阻害剤の開発を進めることが可能である。
HIV転写制御因子の立体構造の決定はHIV阻害剤の開発のための重要な基盤となる。全長Myb蛋白質の結晶構造解析のための試料調製を行った。我々が新たに開発したチオレドキシンを共発現させる大腸菌発現系を用いて、1リットル培養液から約2mgの完全精製蛋白質を得る系を作製できた。今後この系を用いて構造の解明が進み、より多様な阻害剤の開発が可能になることが期待される。

研究成果

• [文献書誌] Ogata, K.: "Solution structures of the c-Myb DNA-binding domain: comparison between the free and DNA-complxed forms" Nature Structural Biology. 2. 309-320 (1995)
• [文献書誌] Mizuguchi, G.: "c-Myb repression of c-erbB-2 transcription by direct binding to the c-erbB-2 promoter" J. Biol. Chem.270. 9384-9389 (1995)
• [文献書誌] Yasukawa, T.: "Increase of solubility of foreign proteins in Escherichia coli by coproduction of the bacterial thioredoxin" J. Biol. Chem.270. 25328-25331 (1995)
• [文献書誌] Otsuka, M.: "Novel zinc chelators with dual activity in the inhibition of the kB site-binding proteins HIV-EP1 and NF-kB" J. Med. Chem.38. 3264-3270 (1995)
• [文献書誌] Ogata, K.: "Confomational flexibility and function of the Myb DNA-binding domain in DNA recognition and trans-activation" Nature Structural Biology. 3. 178-187 (1996)
• [文献書誌] Dai, P.: "CBP as a transcriptional coactivator of c-Myb" Genes & Dev.10(in press). (1996)