卵成熟における減数分裂再開の分子機構

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07283202
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 山下 正兼 北海道大学, 大学院・理学研究科, 助教授 (30202378)
• キーワード: 卵成熟 / 減数分裂 / 魚類 / 両生類 / mRNA / MPF / cdc2 / サイクリンB

研究概要

1.卵成熟促進因子(MPE)の形成・活性化機構
キンギョ卵成熟誘起に重要な意味を持つサイクリンBの翻訳開始機構を探るため、キンギョ卵成熟過程におけるサイクリンBmRNAのポリA鎖の変化を調べた。ポリA鎖は卵核胞崩壊後に伸長することが示され、これはサイクリンBmRNAの翻訳開始より、安定化に関わることが示唆された。サイクリンBmRNAの翻訳開始に関わると予想されるサイクリンB特異的翻訳阻害因子を同定するため、サイクリンBmRNAに結合する蛋白質の検索を行った。その結果、3種のタンパク質が検出され、これらタンパク質をコードするcDNAのクローニングを計画している。
アカガエル卵成熟過程におけるMPFの形成・活性化機構を調べるため、アカガエルサイクリンB1、B2のcDNA(全長の約2/3)をRT/PCRで得、その産物に対する抗体を作製した。これを用い、卵成熟過程におけるサイクリンB1、B2の挙動を調べ、キンギョと同様、アカガエル未成熟卵にはcdc2・サイクリンB複合体はなく、ホルモン刺激後に形成されることがわかった。しかし、キンギョと異なり、ツメガエルと同様、その活性化にはcdc25が必要であることが示された。これらのことは、アカガエルはキンギョとツメガエルの中間的なMPF形成・活性化機構を採用していることを示す。
2.MPFの作用、特に卵成熟に果たす役割
大腸菌で作製されたキンギョサイクリンBタンパク質をゼブラィシュ未成熟卵に注射すると、卵核胞崩壊が起こったが、染色体凝縮は見られなかった。このことは、cdc2・サイクリンB複合体は卵核胞崩壊には関与するが、染色体凝縮には関与しないことを示唆する。

研究成果

• [文献書誌] Naito, Kunihiko 他7名: "Association of p34^<cdc2> and cyclin B1 during meiotic maturation in porcine oocytes." Developmental Biology. 168. 627-634 (1995)
• [文献書誌] Katsu, Yoshinao 他5名: "Molecular cloning and immunological analysis of goldfish cyclin A during oocyte maturation." Developmental Biology. 170. 616-625 (1995)
• [文献書誌] Tanaka, Toyomi 他1名: "Pre-MPF is absent in immature oocytes of fishes and amphibians except Xenopus." Development, Growth & Differentiation. 37. 387-393 (1995)
• [文献書誌] Tokumoto, Toshinobu 他4名: "Purification of latent proteasome(20S proteasome)and demonstration of active proteasome in goldfish(Carassius auratus)oocyte cytosol." Biomedical Research. 16. 173-186 (1995)
• [文献書誌] Tokumoto, Toshinobu 他4名: "Purification and characterization of active proteasome(26S proteasome)from goldfish ovaries." Biomedical Research. 16. 207-218 (1995)
• [文献書誌] Yoshida, Noriyuki 他2名: "Changes in phosphorylation activities during goldfish and Xenopus oocyte maturation." Zoological Science. 12. 599-606 (1995)