抗一細胞接着の分子機構と生理機能の解析

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07308073
• 研究機関: 愛知医科大学
• 研究代表者: 木全 弘治 愛知医科大学, 分子医科学研究所, 教授 (10022641)
• 研究分担者: 関口 清俊 大阪母子保健総合医療センター研究所, 所長 (50187845) ; 大平 敦彦 愛知県心身障害者コロニー, 発達障害研究所, 部長 (20101074) ; 坂倉 照好 三重大学, 医学部, 教授 (80073120) ; 北川 泰雄 名古屋大学, 生物分子応答研究センター, 教授 (50101168) ; 永田 和宏 京都大学, 胸部疾患研究所, 教授 (50127114)
• キーワード: 細胞接着 / 抗一接着 / インテグリン / 細胞外マトリックス / 細胞基質相互作用 / プロテオグリカン / 接着シグナル / キナーゼ

研究概要

木全は、コンドロイチン硫酸プロテオグリカンの抗一接着活性に非感受性の培養細胞2種類を見出した。昨年度、抗接着活性部位であるコンドロイチン硫酸鎖部分の細胞表面レセプター候補分子として同定したannexine VIを欠損している培養細胞を見出し、抗一接着活性におけるannexinの関連を調べる実験系を確立した。これらの細胞にannexine VI遺伝子を導入し、影響を解析している。永田は、HSP47のアンチセンスRNAの安定発現細胞株では基質であるコラーゲンの合成量の低下とともに不溶化が見られ、シャペロンとしての機能を明らかにした。北川は、抗一接着活性をもつラミニンの形成機構について、変異型ラミニン鎖遺伝子を動物培養細胞に発現させてその影響を解析した。坂倉は、テネイシン産生能を持つものと持たない乳癌細胞について細胞形態と遊走力を比較し、前者は丸く、早く遊走し、癌浸潤能が高いことを見出し、その抗一接着活性と癌転移との関係を明らかにした。小原は、テネイシンの示すcrypticな細胞接着活性の発現にはRGD非依存性インテグリンの関与があることを見出して、抗一接着活性との相違を明らかにした。大平は、神経回路網形成期のラット脳に新規の膜結合型プロテオグリカンを見つけニューログリカンCと名付け、細胞接着における影響から神経突起形成における役割を示唆した。岡山は、低転移肺癌細胞と高転移株について、前者は高いシンデカン-2発現によりストレスファイバーの形成が、後者ではインテグリンのみによりラフリング膜形成が誘導される。この細胞接着の差が細胞増殖、運動能の相違をもたらす可能性を示した。関口は、フィブロネクチンのインテグリン結合活性が、特定領域の選択的スプライシングにより制御されていることを発見し、スプライシングの意義を明らかにした。野田は、チロシンフォスファターゼ活性をもつ脳プロテオグリカンを同定し、中枢神経細胞には抗一接着活性を示すことを見いだした。そのリガンドの解析により、プレイオロフィン受容体として機能していることが示された。祖父江は、ラミニンの平滑筋細胞分化因子としての機能を示すとともに、IGF-Iが必須であることが明らかにした。ラミニン接着とIGF-Iを介する分化維持シグナル系としてチロシンリン酸化の関与を見い出した。稲垣は、リン酸化細胞骨格蛋白質特異抗体群の作成に成功して分裂細胞におけるこれらのリン酸化を解析した。Rho制御性キナーゼに類似した未知のキナーゼ(CFキナーゼ)により分裂後期に分裂溝の中間径フィラメント構成蛋白質がリン酸化されることを示し、細胞接着との関連を示唆した。月田は、カドヘリン結合蛋白質でもあり、シグナル伝達因子でもあるβカテニンを安定化させる方法を見出し、さらにそれを核内に発現させると、インテグリン系の活性化が引き起こされることを見出した。第2回目の班会議を名古屋で開催し、班員相互の交流と情報交換を行った。

研究成果

• [文献書誌] R.Perris,R.et al.: "Inhibitory effects of PG-H/aggrecan and PG-M/versican on avian neural crest cell migration." FASEB J. 10・2. 293-301 (1996)
• [文献書誌] Takanosu,M.et al.: "Distribution of chondroitin sulphate proteoglycans and peanut agglutinin-binding molecules during bovine fetal palatine ridge formation." J Anat. 189. 109-115 (1996)
• [文献書誌] Isogai,Z.et al.: "2Bl antigen characteristically expressed on extracellular matrices of human malignant tumors is a large chondroitin sulfate proteoglycan, PG-M/versican." Cancer Res. 56. 3902-3908 (1996)
• [文献書誌] Yada,T.et al.: "Transient accumulation of perisinusoidal chondroitin sulfate proteoglycans during liver regeneration and development." J Histochem Cytochem. 44・9. 969-980 (1996)
• [文献書誌] Kurita,K.et al.: "Occurrence of PG-Lb, a leucine-rich small chondroitin/dermatan sulphate proteoglycan in mammalian epiphyseal cartilage : molecular cloning and sequence analysis of the mouse cDNA." Biochem J. 318. 909-914 (1996)
• [文献書誌] 板野直樹、木全弘治: "プロテオグリカンと癌転移" 現代医療. 28・9. 35-39 (1996)
• [文献書誌] 高木秀和、木全弘治: "細胞基質間接着におけるプロテオグリカンの役割" 実験医学. 14・17. 22-28 (1996)
• [文献書誌] K.NAGATA: "HSP47 : a collagen-specific molecular chaperone in the endoplasmic reticulum." TiBS. (Trends in Biochemical Sciences). 21. 23-26 (1996)
• [文献書誌] Kumagai,C.,Kadowaki,T.and Kitagawa,Y.: "Drosophila laminin assembly formining two types of αβγtrimers in Kc 167 cells" Matrix Biol.(in press).
• [文献書誌] Matsuura,R.etal.: "Deposition of PG-M/versican is a major cause of human coronary restenosis after percutaneous traus luminal coronary angioplasty." J Pathol. 180. 311-316 (1996)
• [文献書誌] Vaidya,P.et al.: "Combined analysis of expression of c-erbB-2, Ki-67 antigen, and tenascin provides better prognostic indicator of carcinoma of the papilla of Vater." Pancreas. 12. 196-201 (1996)
• [文献書誌] Vaidya,P.et al.: "Overexpression of different members of the type 1 growth factor receptor family and their association with cell proliferation in periampullary carcinoma." J Pathol. 178. 140-145 (1996)
• [文献書誌] Tatematsu,M.et al.: "Primary monoclonal and secondary polyclonal growth of colon neoplastic lesions in C3H/HeN Balb/x chimeric mice treated with 1.2-dimethylhydrazine : Immunohistocemical detection of C3H strain-specifie antigen and simple sequence length polymorphism analysis of DNA." Int J cancer. 66. 234-238 (1996)
• [文献書誌] Watanabe,E.,Kushima,Y.and Oohira,A.: "Heparan sulfate proteoglycan associated with growing parallel fibers of granule cells in the rat cerebellar cortex" Journal of Brain Science. 22. 67-75 (1996)
• [文献書誌] Watanabe,E.,Matsui,F.,Keino,H.et al.: "A membrane-bound heparan sulfate proteoglycan that is transiently expressed on growing axons in the rat brain" Journal of Neuroscience Research. 44. 84-96 (1996)
• [文献書誌] Preobrazhensky,A.A.,Oohira,A.et al.: "Identification of a monoclonal antibody AT5 as a new member of HNK-1 antibody family : The reactivity with myelin---" Neurochemical Research. 22(in press). (1997)
• [文献書誌] T.S.H.EL-THAHER et al.: "The pH-dependent, ATP-independent interaction of collagen specific serpin/stress protein HSP47." Prot Pept Lett.3. 1-8 (1996)
• [文献書誌] M.SATOH et al.: "Intracellular interaction of collagen-specific stress protein HSP47 with newly synthesized procollagen." J. Cell Biol.133. 469-483 (1996)
• [文献書誌] N.KAWADA et al.: "Expression of heat-shock protein 47 in mouse liver." Cell Tissue Res.284. 341-346 (1996)
• [文献書誌] A.NAKAI et al.: "HSF4, a new member of the human heat shock factor gene family which lacks properties of a transcriptional activator." Mol. Cell. Biol.17. 469-481 (1997)
• [文献書誌] K.NAGATA et al.: "Involvement of HSP47 in the folding and processing of procollagen in the ER." Molecular Chaperones in Proteins;. (In press). (1997)
• [文献書誌] Jeon,H.,Ono,M.,Kumagai,C.,Miki,K.,Morita,A.,Kitagawa,Y.: "Pericytes from microvessel fragment produce type IV collagen, entactin/nidogen and multiple laminin isoforms." Biosci. Biotech. Biochem.60. 856-861 (1996)
• [文献書誌] Niimi.T.and Kitagawa,Y.: "Distinct role of mouse laminin β1 long arm domains for α1β1γ1 trimer formation." FEBS Letters. 400. 71-74 (1997)
• [文献書誌] Niimi,T.,Miki,K.and Kitagawa,Y.: "Expression of the long arm sequence of mouse laminin α1, β1 or γ1 chain in COSI cells and assembly of monkey-mouse hybrid laminin." J. Biochem.(In press).
• [文献書誌] Fukuda,T.,Kawano,H.,Ohyama,K. et al.: "Immunohistochemical evidence for molecular interactions implicated in the formation of the thalamocortical---" Journal of Comparative Neurology. (in press). (1997)
• [文献書誌] 大平敦彦: "神経回路形成と脳特異プロテオグリカン" 神経研究の進歩. 44. 952-960 (1996)
• [文献書誌] 時田義人、大平敦彦: "脳特異プロテオグリカン;ニューログリカンC、ニューロカン、ホスファカン" 蛋白質 核酸 酵素. 42. 567-570 (1997)
• [文献書誌] Akamatsu,H.et al: "Suppression of transformed phenotypes of human fibrosarcoma cells by overexpression of recombinant fibronectin." Cancer Research. 56. 4541-4546 (1996)
• [文献書誌] Chen,J.et al: "Distinct structural requirements for interaction of the integrins α5β1, αvβ5, and αvβ6 with the central cell binding domain in fibronectin." Cell Adhesion and Communication. 4. 237-250 (1996)
• [文献書誌] Murayama,O.et al: "Novel peptide ligands for integrin α6β1 selected from a phage display library." Journal of Biochemistry. 120. 445-451 (1996)
• [文献書誌] Yamamoto,H.et al: "Abrogation of lung metastasis of human fibrosarcoma cells by ribozyme-mediated suppression of integrin α6 subunit expression." International Journal of Cancer. 65. 519-524 (1996)
• [文献書誌] Hino,K.et al: "Adherence of synovial cells on EDA+fibronectin." Arthritis Rheumatism. 39. 1685-1692 (1996)
• [文献書誌] M.Obara and K.Yoshizato: ""The Gly-Arg-Glu-Ser-Lys-Prosequence of the fibronectin type III4 repeat is required for the fibroblast-mediated collagen gel contaction."" Mol. Biol. Cell. 7. 63a- (1996)
• [文献書誌] 小原政信・吉里勝利: "コラーゲンマトリックスの機能解析" 医学のあゆみ、医歯薬出版. 177. 13-16 (1996)
• [文献書誌] Itano,N.et al.: "Phosphorylation of a membrane intercalated proteoglycan, syndecan-2, expressed in a shtroma inducing clone from a mouse lung carucinoma." Biochem J. 315. 925-930 (1996)
• [文献書誌] 岡山實他: "がん転移と細胞接着分子" 現代科学. 308. 51-57 (1996)
• [文献書誌] 草野(水野)由理他: "細胞外マトリックス受容体シンデカン-2のヘパラン硫酸鎖に含まれるフィブロネクチン結合部位の糖鎖構造" Biotherapy. 10. 1318-1323 (1996)
• [文献書誌] Saga H.et.al.: "Paradoxical expression of α-smooth muscle actin in visceral and vascular smooth muscle cells in their phenotype-dependent manner." J. Biol. Chem.(in press). (1997)
• [文献書誌] Kashiwada K.et.al.: "Coordinate expression of α-tropomyosin and caldesmon isoforms in association with phenotypic modulation of smooth muscle cells." J. Biol. Chem.(in press). (1997)
• [文献書誌] Ando Y.et.al.: "Enhanced golmerular expression of caldesmon in IgA nephropathy and its suppression by glucocorticoid therapy." J. Clin. Invest.(in press). (1997)
• [文献書誌] Obata H.et.al.: "Smooth muscle cell phenotype-dependent transcriptional regulation of the α1 integrin gene." J. Biol. Chem.(in press). (1997)
• [文献書誌] Sobue K.et.al.: "Phenotype-dependent gene regulation of smooth muscle cell-specific cytoskeletal proteins." Mol. Cell Biochem.(in press). (1997)
• [文献書誌] Hayashi K.et.al.: "IGF-I and laminin-generated signallings are essential for maintaining a differentiated phenotype of smooth muscle cells." J. Biol. Chem.(in press). (1997)
• [文献書誌] Inagaki,M.et al.: "Dynamic property of intermediate filaments : Regulation by phosphorylation." Bio Essays.18. 481-487 (1996)
• [文献書誌] Takai,Y.et al.: "Mitosis-specific phosphorylation of vimentin by protein kinase C coupled with reorganization of intracellular membranes." J. Cell Biol.133. 141-149 (1996)
• [文献書誌] Sekimata,M.et al.: "Detection of protein kinase activity specifically activated at metaphase-anaphase transition." J. Cell Biol.132. 635-641 (1996)
• [文献書誌] Maeda,et al.: "6B4 proteoglycan/phosphacan, an extracellular variant of receptor-like protein-tyrosine phosphatase ζ/RPTPβ, binds pleiotrophin/heparin-binding growth-associated molecule (HB-GAM)" Journal of Biological Chemistry. 271・35. 21446-21452 (1996)
• [文献書誌] Furuse,M.,Fujimoto,K.,Sato,N.,Hirase,T.,Tsukita,Sa.,and Tsukita,Sh.: "Overexpression of occludin, a tight junction-associated integral membrane protein, induces the formation of intracellular multilamellar bodies bearing tight junction-like structures." Journal of Cell Science. 109. 429-435 (1996)
• [文献書誌] Tokai,N.,Fujimoto-Nishiyama,A.,Toyoshima,Y.,Yonemura,S.,Tsukita,Sh.,Inoue.J.,and Yomamoto,T.: "Kid,a novel kinesin-like DNA binding protein, is localized to chromosomes and the mitotic spindle" EMBO Journal. 15. 457-467 (1996)
• [文献書誌] Hirase,T.,Furuse,M.,and Tsukita,Sh.: "A155kDa undercoat-constitutive protein of cell-to-call adherens junctions" European Journal of Cell Biology. (in press). (1996)
• [文献書誌] Ando-Akatsuka,Y.,Saitou,M.,Hirase,T.,Kishi,M.Sakakibara,A.,Itoh,M.,Yonemura,S.,Furuse,M.,Tsukita,Sh.: "Interspecies diversity of the occuldin sequence : cDNA cloning of human, mouse, dog and rat-kangaroo homologues" Journal of Cell Biology. 133. 43-47 (1996)
• [文献書誌] Hirao,M.,Sato,N.,Kondo,T.,Yonemura,S.,Monden,M.,Sasaki,T.,Takai,Y.,Tsukita,Sh.and Tsukita,Sa.: "Regulation mechanism of ERM (EZRIN/Radixin/Moesin) Protein/Plasma Membrane Association : Possible Involvement of Phosphatidylinositol Turnover and Rho-dependent Signaling Pathway" Journal of Cell Biology. 135. 1-16 (1996)
• [文献書誌] MacCarthy,K.M.,Skare,I.B.,Stankewich M.C.Furuse,M.,Tsukita,Sh.,Rogers,R.A.,Lynch.R.D.,and Schneeberger,E.E.: "Occuldin is a functional component of the tight junction." Journal of Cell Science. 109. 2287-2298 (1996)
• [文献書誌] 木全弘治: "細胞外マトリックス 概論(分担、pp.28-31)" 実験医学別冊 用語ライブラリー細胞接着 羊土社, (1996)
• [文献書誌] 杉浦信夫、木全弘治: "GAG-脂質誘導体を用いた細胞接着阻害実験(分担、pp.268-272)" 細胞工学別冊 実験プロトコールシリーズ グライコバイオロジー実験プロトコール-糖タンパク質・糖脂質・プロテオグリカン-秀潤社, (1996)
• [文献書誌] 大平敦彦他: "Bio Science用語ライブラリー「細胞接着」(分担、pp.43-51)" 羊土社「実験医学別冊」(宮坂昌之、矢原一郎編), 205 (1996)
• [文献書誌] 大平敦彦、松井ふみ子: "グリコバイオロジー実験プロトコール(分担、pp.86,pp.305)" 秀潤社「細胞工学別冊」(谷口、鈴木、古川、菅原監修), 382 (1996)
• [文献書誌] 岡山實他: "細胞外マトリックス-臨床医学への応用-(分担執筆:シグナル伝達)" 渡邊明治・岡崎勲編、メディカルレビュー社, (1996)
• [文献書誌] 小栗佳代子他: "グライコバイオロジー実験プロトコール(分担執筆:セルロース アセテート膜電気泳動によるGAGの同定)" 谷口直之・鈴木明身・古川清・菅原一幸編、秀潤社, (1996)
• [文献書誌] 岡山實他: "グライコバイオロジー実験プロトコール(分担執筆:β-D-キシロシドを用いたGAG糖鎖の生合成実験法)" 谷口直之・鈴木明身・古川清・菅原一幸編、秀潤社, (1996)