| 研究課題/領域番号 |
07406005
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
生物生産化学・応用有機化学
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
宗像 英輔 筑波大学, 応用生物化学系, 教授 (60072766)
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| 研究分担者 |
向井 秀仁 筑波大学, 応用生物化学系, 講師 (20251027)
後藤 勝年 筑波大学, 基礎医学系, 教授 (30012660)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1997
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| キーワード | 新規生体機能調節ペプチド / サイトカイン / ケモカイン / 好中球活性化因子 / 細胞生存活性因子 / 構造解析 / アミノ酸配列決定 / MALDI-TOF質量分析 |
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| 研究概要 |
生体中には、まだ多くの未知の生理機能を有するペプチドが存在すると考えられており、ひとつでも多く新しい生体機能調節ペプチドを見付けだし、その生理学的性質を明らかにすることは、基礎的には生体機能の理解に役立つばかりでなく、応用面からは健康の維持や様々な疾病に対する医薬の開発に指針をもたらすことが期待される。本研究は、ブタ心臓を素材に、心臓を中心とした循環器系の機能を調節制御するペプチド性因子を系統的に検索・単離・構造決定の後、そのペプチドを化学合成し生理機能を生化学的・薬理学的に解明することを目的として行ったものである。
新規物質のスクリーニングで本研究においては、生体防御機構に深く関わると考えられるケモカイン(Chemokines)類の検索を中心に行なってきた。指標として用いたバイオアッセイは、(1)好中球様に分化させたHL-60(Human Leucemia)細胞が活性化される際のβ-hexosaminidaseの分泌、(2)繊維芽細胞(Fibroblast)の株細胞であるNIH/3T3における生存活性(Survival assay)をMTT法で検定することなどで、ブタ心臓の抽出物のうちペプチドから比較的低分子量の蛋白相当の画分につき系統的な検索を行ない、逆相液体クロマトグラフにより活性分画を精製し、エドマン法ならびに質量分析により構造解析を行なった。その結果、HL-60(Human Leuchemia)細胞に対して活性化作用を示す画分として決定された配列はブタcytochromebのN端部位に相当することが、蛋白質構造のdatabaseに基づく検索で明らかになり、cytochrome bが生体防御に重要な役割を果たしていることが予想された。
さらに、NIH/3T3における生存活性を示す画分として単離精製を行なったアミノ酸62残基からなり3個の-S-S-架橋を持つ、新規ペプチドの構造解析を行い、化学合成の結果このペプチドも、細胞の生存ないし防御に深く関わるものであると予想される。
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