研究課題
今年度は、ファイトプラズマ(phytoplasma)の分子進化学的解析を行い、ゲノム解析および分子診断システムの確立を目的に研究を行った。まず、各種ファイトプラズマ分離株を集め、そのゲノムをCTAB法により精製し、PCRにより16SrRNA遺伝子を増幅し、ダイレクトシークエンシングにより全塩基配列を決定した。また、大型コンピュータのデータベースをもとに、海外のファイトプラズマを含む他の微生物の16SrRNA遺伝子の最新の配列データを検索し、先に得られた塩基配列データとの比較を行った。すなわち、大型解析プログラム「ODEN」により分子系統樹を構築し、「Bootstrap」を行い信頼性を解析した。得られた解析データをもとに、ファイトプラズマの分類体系を確立した。以上の解析データと分類体系をもとに、ファイトプラズマに「種」の分類を適用し、その判別に最適な「種」特異的プライマーをデザイン・合成した。合成したプライマーを用いて各々の「種」特異的PCRを行い、アジア各地の未知のファイトプラズマ分離株の分類を試みた。
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