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1995 年度 実績報告書

高等植物プロテインキナーゼCの分子特性と硝酸還元酵素リン酸化の環境応答解析

研究課題

研究課題/領域番号 07456039
研究種目

一般研究(B)

研究機関神戸大学

研究代表者

王子 善清  神戸大学, 農学部, 教授 (90031195)

研究分担者 吉川 潮  神戸大学, バイオシグナル研究センター, 教授 (40150354)
南森 隆司  神戸大学, 農学部, 助教授 (00180555)
杉本 敏男  神戸大学, 農学部, 助教授 (70240851)
キーワードPROTEIN KINASE C / SIGNAL TRANSDUCTION / PLANT PROTEIN KINASE / PROTEIN KINASE
研究概要

本年度の本研究では、高等植物コマツナ(Brassica campestris L.)の本葉からPKCの分離、精製を試み、硫安沈殿及び二段階のカラムクロマトグラフィー(陰イオン交換カラムクロマトグラフィー、疎水性カラムクロマトグラフィー)により、リン脂質依存性/カルシウム依存性PK活性画分を得、これについて免疫学的解析及び自己リン酸化能の解析を行った。その結果、本葉でPKC活性が発現されていることが判明した。次に、既知のPKC遺伝子のアミノ酸配列のアライメントをもとに、その保存領域の混合プライマーを作製し、それらを組み合わせて、コマツナmRNAを鋳型に用いてReverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction(RT-PCR)を行った。得られたPCR産物をクローン化し、その塩基配列を解析した。その結果、プロテインキナーゼと考えられる配列を持つクローンを幾つか得た。その中の1つで、新規なキナーゼと考えられる配列の一部であるbcpk1は、カビ(Trichoderma reesei)PKC様遺伝子と非常に高い相同性(アミノ酸レベルで92.4%)を有していた。bcpk1はPKCの特徴の1つとして考えられるサブドメインV内のアミノ酸配列であるG-G-D-L-M、サブドメインVIa内のF-Y-A-A-E、及びサブドメインVIII内のT-F-C-G-T(-P)を保持しており、このことからPKCとbcpk1は同じファミリーに属することが示唆された。更に、コマツナゲノムサザンハイブリダイゼーション解析の結果よりbcpk1がコマツナ遺伝子に存在することが明らかになり、高等植物PKCホモローグ遺伝子が極めて高い確率で存在することが裏付けられた。

  • 研究成果

    (2件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (2件)

  • [文献書誌] MICHIKO KOJIMA: "Phosphorylation/dephosphorylation of Komatsuna leat nitrate reductase in vivo and in vitro in response to environmental light condition" Physiologia Plantarum. 93. 139-145 (1995)

  • [文献書誌] TAKASHI NANMORI: "Puritication and chardcterization of protein Kinase C from a higher plant, Brassica campestris L." BIOCHEM. BIOPHYS. RES. COMMUN.203. 311-318 (1994)

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公開日: 1997-02-26   更新日: 2016-04-21  

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