| 研究課題/領域番号 |
07456097
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 研究機関 | 香川大学 |
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研究代表者 |
奥谷 康一 香川大学, 農学部, 教授 (00036013)
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| 研究分担者 |
茂田 士郎 福岡県立医科大学, 教授 (00045634)
松田 政広 香川大学, 農学部, 助手 (50253258)
岡崎 勝一郎 香川大学, 農学部, 教授 (60109733)
門谷 茂 香川大学, 農学部, 教授 (30136288)
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| キーワード | 抗エイズウイルス / 多糖 / 海洋微細藻 / Cochlodinium |
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| 研究概要 |
瀬戸内海で採集し、研究室保存株の微細藻Cochlodinium polykrikoidesの無菌株を調製し、これを多糖生産株として維持し使用した。最初に微細藻の培養条件についてのデータを得るため、グロースキャビネットを用いて温度、光、通気条件培養時間を検討した結果から、培養は岡市らによる海水栄養塩添加培地(ESM)を用い、21℃、3500Lxで行った。培養液を濾過し藻体を除いて得た上澄液からエタノール沈殿、Cetavlon沈殿により酸性多糖を集めた。透析後、凍結乾燥して多糖標品を得た。これはDEAE-celluloseカラムクロマトにより1Mおよび2M NaClで溶出される画分に分かれ、分離・精製した多糖は、超遠心及びセルロースアセテート膜電気泳動分析で均一性の高いことが認められた。精製多糖の抗ウイルス活性試験にはエイズウイルスとしてHIV-1のHTLVIII-B株/MT-4、その他のウイルスとしてFLUV-AのIshikawa株(H3N2) /MDCK、FLUV-BのSingapore株/MDCK、PFLUV-2のGreer株/HMV-2、PFLUV-3のC-243株/HMV-2、HSV-1のKOS株/HMV-2、PSV-AのLong株/HEp-2、RSV-AのFM58-8株/HEp-2、RSV-BのSM6148株/HEp-2、MLSVのEdmonston株/HMV-2、MPSVのECXH-3株/HMV-2を用いた。抗ウイルス活性の測定は、MTT法を用いてEC50値を判定した。また、抗凝固活性はPTおよびAPTTにより判定した。本多糖は、HIV-1に対して1.7μg/ml、FLUV-Aには0.45〜1.1μg/ml、同Bには7.1〜8.3μg/ml、PFLUV-2には0.8〜25.3μg/ml、RSV-Aには2.0〜3.0μg/ml、同Bには0.8μg/mlの濃度でEC50値を示し有効と認められた。これに対し、MLSV、PFLUV-3、MPSV,およびHSV-1には抗ウイルス活性を示さなかった。本多糖は、使用した細胞系に対して100μg/mlの濃度で全く細胞毒性を示さず、培養T細胞(MT-4)に対してはかえつて増殖促進効果を示した。また、硫酸多糖に特有の抗血液凝固作用も見られなかった。
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