| 研究課題/領域番号 |
07456129
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
基礎獣医学・基礎畜産学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
伊藤 茂男 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助教授 (40109509)
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| 研究分担者 |
太田 利男 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 講師 (20176895)
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| 研究期間 (年度) |
1995 – 1996
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| キーワード | イヌパラサイロイドホルモン / PTH受容体 / cDNAクローニング / ノーザンブロット解析 / 環状AMP / 平滑筋 / 細胞内Ca濃度 / 膜電位固定法 |
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| 研究概要 |
(1)イヌ肝臓と腎臓のcDNAライブラリーよりパラサイロイドホルモン(PTH)受容体をコードするcDNAクローニングを行った。イヌPTH授与体は7個の膜貫通領域を持つ蛋白質で、ヒト、ラット及びオッポサムとの類似性は、アミノ酸レベルでは95.3%、88.0%、79.1%であり、ヒトのそれと最も高い類似性を持つことが示された。また、イヌの各組織のノーザンブロット解析を行ったところ、腎臓、肝臓、脳、大動脈、骨髄において、陽性シグナルが得られた。(2)ラット前腸間膜動脈のリング標本を用いて、各種薬物による収縮反応と細胞内Ca^<2+>濃度に対するPTHの作用を調べた。PTHは高濃度K^+よりもフェニレフリンによる収縮と細胞内Ca^<2+>濃度上昇を強く抑制した。また、PTHはカフェインによる細胞内Ca^<2+>ストアからのCa^<2+>誘発性Ca^<2+>放出作用に影響を与えることなく、フェニレフリンによるイノシトール三燐酸誘発性Ca^<2+>放出を抑制した。PTHは高濃度K^+による細胞内Ca^<2+>濃度増加に大きな影響を与えることなく、収縮反応を優位に抑制したころから、平滑筋の収縮蛋白質を直接抑制していると思われた。PTH受容体を介する細胞内情報伝達は、興奮性G蛋白質が関与しアデニール酸シクラーゼの活性化を起こすと考えられた。(3)消化管平滑筋において細胞内Ca^<2+>ストアから放出されるCa^<2+>の作用及びストアへ取り込まれるCa^<2+>の源を調べた。ストアから放出されたCa^<2+>は収縮のみならずCa^<2+>依存性K^+チェネルを活性化させた。また、電位依存性Ca^<2+>チャネル以外のCa^<2+>チャネルから流入したCa^<2+>がストアに効率的に取り込まれており、これらの過程に環状AMPが作用すると考えられた。
以上の成績はイヌPTH受容体はヒトのそれと類似性が高いこと、またこの受容体はGsタンパク質を介してアデニレートシク-ラゼと共役しており、過剰な刺激は環状AMPを介するタンパク質燐酸化が生ずることが示唆される。
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