| 研究課題/領域番号 |
07456149
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
南森 隆司 神戸大学, 農学部, 助教授 (00180555)
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| 研究分担者 |
王子 善清 神戸大学, 農学部, 教授 (90031195)
深見 泰夫 神戸大学, 遺伝子実験施設, 助教授 (00156746)
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| キーワード | PROTEIN KINASE C / SIGNAL TRANSDLICTION / EUGLENA / PROTEIN KINASE |
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| 研究概要 |
本年度の本研究では、ミドリムシ(Euglena gracilis Z)からPKCの分離、精製を試み、硫安沈殿及び二段階のカラムクロマトグラフィー(陰イオン交換カラムクロマトグラフィー、疎水性カラムクロマトグラフィー)により、リン脂質依存性/カルシウム依存性PK活性画分を得、これについて免疫化学的解析及び自己リン酸化能を行った。その結果、ミドリムシにはPKC活性が発現されていることが判明した。次に、既知のPKC遺伝子のアミノ酸配列のアライメントをもとに、その保存領域の混合プライマーを作製し、それらを組み合わせて、ミドリムシmRNAを鋳型に用いてReverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction(RT-PCR)を行った。得られたPCR産物をクローン化シ、その塩基配列の解析を現在行っている。その結果、プロテインキナーゼと考えられる配列を持つクローンを確認している。このキナーゼは小麦由来のアプシジン酸誘導プロテインキナーゼのキナーゼドメインの一部とアミノ酸レベルで92.5%の相同性を有していた。現在、RT-PCRフラグメントクローンの塩基配列の決定を繰り返し、PKCホモローグ遺伝子の同定を目的に研究を行っている。
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