血液系免疫系細胞におけるp72^<syk>の生理及び病理作用の分子機構

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07457043
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 山村 博平 神戸大学, 医学部, 教授 (90030882)
• 研究分担者: 定 清直 神戸大学, 医学部, 助手 (10273765) ; 柳 茂 神戸大学, 医学部, 助手 (60252003) ; 南 康博 神戸大学, 医学部, 助教授 (70229772)
• キーワード: チロシンキナーゼ / Syk / CD45 / チロシンホスファターゼ / ZAP-70 / 過酸化水素 / 活性酸素 / ホスホリパーゼD

研究概要

1)DT40細胞を用いてチロシンホスファターゼCD45のジーンターゲティングを行った。その結果、CD45をノックアウトした場合、Syk及びLynのリン酸化は著名に促進する。しかしSykは少し活性が上昇するが、Lynの活性化はみられない。このことはLynのチロシンリン酸化部位である自己リン酸化部位(活性上昇)とCskによるリン酸化部位(活性抑制)の双方がCD45によって制御されているが、Cskのリン酸化が強いと自己リン酸化部位がリン酸化されても活性の上昇にはいたらないことを示している。2)ホスホリパーゼD(PLD)の活性化におけるSykの役割をDT40細胞に用いて検討したところ、SykはPLDをリン酸化しその活性を上昇させることを明らかにした。3)脳、神経細胞における新しいSykファミリーチロシンキナーゼを探索しているが、Sykと同じファミリーに属するZAP-70の抗体と反応する蛋白質をとらえている。現在この蛋白質のアミノ酸の順列を明らかにしている。ついでそのcDNAのクローニングを行う予定である。4)Sykは外からのオキシダントやNADPHオキシダーゼによって産生される活性酵素によって強く活性化されることが明らかにされてきた。これらの活性酵素の一つである過酸化水素はB細胞受容体の刺激同様、カルシウムの流入と細胞内チロシン残基の燐酸化を亢進させることを明らかにした。過酸化水素はc-junやc-fosの発現を引き起こすことができるが、これらの過酸化水素によって引き起こされる細胞内カルシウムの増加やJNKの活性化などの生理的応答はSykに依存することを明らかにした。過酸化水素によるSykの活性化と浸透圧刺激によるSykの活性化の質的差異については、特にカルシウムの動員に大きな差があることを明らかにした。5)Sykと先天性、後天性免疫不全疾患との関係の解析については、まだ症例を得ることができなかった。ただSykの欠損マウスが致死的であることが判明しSykに傷害のある免疫不全症及び血液疾患の存在は予想される。

研究成果

• [文献書誌] Maruyama,S.et.al.: "Physical and functional association of cortactin with Syk in human leukemic cell line K562." J.Biol.Chem.271(12). 6631-6635 (1996)
• [文献書誌] Qin,S.et.al.: "Cooperation of tyrosinekinases p72 ^<syk> and p53/56 lyn regulates calcium mobilization in chicken B cell oxidant stress signaling." Eur.J.Biochem.236(2). 443-449 (1996)
• [文献書誌] Minami,Y.et.al.: "Role of protein-tyrosine kinases in stress signaling." J.Deuterium Sci.5(1). 11-14 (1996)
• [文献書誌] Nakamura,T et.al.: "Sigunal transduction through μκ B-cell receptors expressed on pre-Bcells is different from that through B-cell receptors on mature B cells." Immunology. 88. 593-599 (1996)
• [文献書誌] Yanagi,S.et.al.: "CD45 Modulates phosphorylation of Both Autophosphorylation and Negative Regulatory Tyrosines of Lyn in B Cells." J.Biol.Chem.271(48). 30487-30492 (1996)
• [文献書誌] Qin,S.et.al.: "Syk-dependent and -independent Signaling Cascases in B Cells Elicited by Osmotic and Oxidative Stress." J.Biol.Chem.(in press.).