| 研究課題/領域番号 |
07457090
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(B)
|
| 研究機関 | 愛知県がんセンター |
|---|
研究代表者 |
小幡 裕一 愛知県がんセンター, 免疫学部, 室長 (30177290)
|
|---|
| 研究分担者 |
土井 了 愛知県がんセンター, 免疫学部, 主任研究員 (60227684)
高橋 利忠 愛知県がんセンター, 副所長 (00124529)
辻村 邦夫 愛知県がんセンター, 免疫学部, 主任研究員 (10227407)
|
|---|
| キーワード | 生体防御 / マウスTL / 非古典的MHCクラスI分子 / γδT細胞 / 胸腺内選択 / αβT細胞 / 遺伝子導入マウス / 抗原分子 |
|---|
| 研究概要 |
生体防御における非古典的MHCクラスI分子の役割を解明するために、マウスTL分子の解析を中心に、TL分子を認識するT細胞の解析とTL分子に結合する抗原分子の同定を試み、以下の結果を得た。
(1)TL分子によるγδT細胞の胸腺内選択:T細胞レセプター(TCR)がTL分子を直接認識することは、当グループがこれまでの研究で明らかにしている。今回、TL分子を認識する細胞傷害性T細胞(CTL)の誘導を、胸腺にTL分子を発現するTL遺伝子導入マウスを用いて行った。コントロールとして、胸腺にTL分子を発現しない導入宿主であるC3Hマウスを用いた。TL遺伝子導入マウスからはγδ型CTLが15-20%の頻度で誘導されるのに対し、C3Hマウスからはαβ型CTLしか誘導できなかった。γδ型CTLが胸腺起源であることは、各種細胞表面マーカーの検索とTCRγ鎖のV領域の塩基配列の決定より確認された。これらの結果より、胸腺に発現するTL分子はγδT細胞を特異的に選択すると結論された。
(2)TL分子を認識するαβT細胞のCD8依存性:TL分子を認識するαβ型CTLクローンはすべてCD8を発現するが、CTL活性にCD8の存在を必要とするクローンと必要としないクローンがある。CD8依存性のクローンはVβ2もしくはVβ15を、非依存性のクローンはVβ8もしくはVβ14を選択的に使用している。この結果は、αβTCRによるTL分子の認識に2種類以上の様式が存在することを示唆しており、解析を継続している。
(3)TL分子と結合する抗原分子:TL分子を大量に発現するH-2K^b/TLキメラ遺伝子導入マウスの脾細胞(1×10^<11>)より、TL抗原カラムを用いて、TL分子を分離した。次に、逆相HPLCとタンデム・マススペクトロメトリー(MS/MS)を用いて、TL分子に結合しているペプチドの存在の有無を検索した。同時にコントロールとして、H-2K^b分子結合ペプチドの同定を行った。精製したTL分子のモル数とH-2K^b分子とその結合ペプチドのモル数との比較から、TL分子には低レベルのペプチドもしくはH-2K^bとは異なる種類の抗原分子が結合していることが示唆され、解析を続けている。
|
